菌种复苏、传代是微生物实验室最基础的操作。很多菌落形态异常、质控不合格、数据不稳定的问题，根源并不是培养基，而是菌种活化状态不对、传代不规范。
今天用一篇文章，讲清菌种的正确复苏+规范传代流程。
1、 菌种复苏
无论是甘油冻存菌株、瓷珠保藏菌株还是冻干菌株，复苏核心原则只有一句：快速融化、立即接种。
标准操作步骤 ：
1. 取出低温冻存菌种，迅速放入37℃水浴，轻轻晃动，1-2分钟完全融化，避免长时间室温放置。
2. 融化后立即在生物安全柜内开盖，全部转接至适宜的液体复苏培养基（如TSB/BHI肉汤），或直接划线接种非选择性平板（如TSA）。
3. 按对应菌种标准温度培养18-24h，革兰氏菌、致病菌严禁超时培养，防止老化变异。
注意：复苏第一代菌严禁直接用于质控试验，必须传代纯化一次，菌落形态、生长状态稳定后方可使用。
2、 菌种传代
传代的目的，是获得新鲜、活力强、性状稳定的工作菌株，而不是无限转接。
标准传代流程 ：
1. 选取复苏后生长良好、形态典型的单菌落作为传代菌种。
2. 接种环灼烧灭菌、冷却后，挑取少量菌体，在新鲜TSA斜面或平板上均匀划线。
3. 恒温培养18-24h，观察菌落形态、颜色、大小是否符合标准特征。
4. 合格后密封保存，清晰标注菌种名称、编号、传代次数、传代日期。