一、方法选择
二、样品制备
无菌操作取25 g/25 mL样品，加入225 mL磷酸盐缓冲液或生理盐水，均质1 min~2 min，制成1:10匀液，再按需进行10倍系列稀释。生理盐水提供适宜的渗透压环境，磷酸盐缓冲液具有缓冲作用。
注：
·必要时用 1 mol/L NaOH或HCl调pH至6.5~7.5。
·每递增1个稀释度，均应更换无菌吸管或吸头，避免带入上一级样品。
·从制备样品匀液到接种完成，过程不应超过15 min。
三、MPN计数法
1.LST初发酵观察产气
每个样品选择3个适宜的连续稀释度，每个稀释度接种3管月桂基硫酸盐胰蛋白胨（LST）肉汤；贝类及产品每个稀释度接种5管LST肉汤。每管接种1 mL样品匀液；接种体积超过1 mL时，应加入等体积双料LST肉汤。
36 ℃±1 ℃培养24 h±2 h，观察产气情况；未产气时继续培养至48 h±2 h。产气管进入复发酵试验；48 h±2 h仍未产气，则判为阴性。
2.EC复发酵筛选
从产气的LST肉汤中取培养物转接至EC肉汤，置44.5 ℃±0.2 ℃水浴培养24 h±2 h；未产气时继续培养至48 h±2 h。水浴液面应至少高于EC肉汤培养基液面1 cm～2 cm。
注：
·肉汤浑浊与产气应分别观察。
·记录时保持LST管、EC管和后续平板的编号对应，避免最后统计阳性管数时混淆。
3.TBX确认识别蓝绿色菌落
对产气EC肉汤，用接种环划线接种胰蛋白胨胆盐X-葡萄糖醛酸苷（TBX）琼脂平板，36 ℃±1 ℃培养18 h～24 h。TBX平板出现蓝绿色菌落，且对应EC肉汤产气，可判为E.coil 阳性；根据3个连续稀释度的阳性管数查MPN表，报告结果。
四、平板计数法
1.接种与培养
选择2个～3个适宜的连续稀释度，每个稀释度接种2个无菌培养皿，每皿1 mL；同时接种2个空白对照。将冷却至48 ℃±2 ℃的TBX琼脂倾注至培养皿中，每皿约15 mL～20 mL，轻轻旋转混匀，待凝固后翻转平板，36 ℃±1 ℃培养18 h～24 h。
注：
·从制备样品匀液到倾注TBX琼脂完成，过程不应超过15 min。
·倾注后应先沿一个方向轻轻旋转3次～5次，再换方向旋转3次～5次，避免混匀不充分或菌落飞溅至平板上方。
2.菌落选择与结果报告
选择典型菌落数在15 CFU～150 CFU之间的平板进行计数，并按标准规定的计算原则得出结果。结果小于100 CFU时，按“四舍五入”修约，以整数报告；结果大于或等于100 CFU时，保留两位有效数字。固体样品以CFU/g报告，液体样品以CFU/mL报告。
注：
·所有平板典型菌落数均小于15 CFU时，按最低稀释度平板的典型菌落平均值计算；所有平板典型菌落数均大于150 CFU时，对最高稀释度平板计数，其余平板记录为多不可计。
·空白对照出现菌落时，本次检验结果无效。
五、检验原理与判读边界
E.coil 可在44.5 ℃条件下发酵乳糖产酸产气，多数菌株具有β-葡萄糖醛酸苷酶活性，可分解TBX琼脂中的显色底物（5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-葡萄糖醛酸苷），在平板上形成蓝绿色菌落。MPN法和平板计数法均利用了上述特性。
值得注意的是，E.coil O157等菌株不具有β-葡萄糖醛酸苷酶活性，肠杆菌科内部分志贺氏菌、沙门氏菌等也可能具有该酶活性。因此不能脱离培养流程，仅凭平板颜色作出结论。
六、培养基原理与注意事项
检测流程中，不同培养基承担着不同功能。培养基的配制、灭菌、储存与使用状态，都会影响目标菌生长和结果判读。
七、标准化培养基，让检测流程更简单
大肠埃希氏菌检验涉及多种培养基及配套耗材，尤其是采用MPN法时，需要梯度稀释大量样品。实验室自行制备的流程，需要完成称量、灭菌、分装、冷却与倾注等等操作，对人员操作精确度和一致性有较高要求。
围绕GB 4789.38—2025检验流程，逗点生物提供覆盖检验全流程的产品解决方案，实验室可结合检测量、样品类型及使用习惯，选择合适的产品形式。
标准化、即用型的培养基产品，为实验室的日常检测提供更加便捷的选择。Aiculture®即用型产品，在使用时无需重复进行复杂的制备流程，即开即用，减少操作步骤，规格灵活，满足不同使用场景，提升检测效率和结果一致性。
