1、 沙门氏菌检验流程

沙门氏菌检验通常涉及以下几个主要环节:

图1 沙门氏菌检验流程

其中,预增菌、选择性增菌和分离培养是后续鉴定的重要基础,各环节的培养条件及操作规范都需要严格按照标准执行。

2、 预增菌——恢复受损菌体

无菌操作取25 g(mL)样品,加入225 mL缓冲蛋白胨水(BPW),均质1 min~2 min,36℃培养8-18h。

对于乳粉样品,加入BPW后暂不调整pH也不混匀,室温静置60±5 min后再混匀,36℃培养16-18h,此操作有助于受损沙门细菌的恢复,提高检出率。

注:

·必要时用 1 mol/L NaOH或HCl调pH至6.8±0.2。

·冷冻样品如需解冻,取样前在40℃~45℃的水浴中解冻不超过15 min,或在2℃~8℃冰箱缓慢化冻不超过18 h。

3、 选择性增菌——提高目标菌检出

取0.1 mL转种于10 mL氯化镁孔雀绿大豆胨增菌液(RVS) 中混匀,42 ℃±1 ℃培养18h~24h。

取1 mL转种于10 mL四硫磺酸钠煌绿增菌液(TTB) 中混匀,36 ℃±1 ℃培养18h~24h(低背景样品)或42 ℃±1 ℃培养18h~24h(高背景样品)。

RVS与TTB选择性机制互补,同时使用可提高沙门氏菌检出率,降低漏检风险。

4、 分离培养——观察典型或可疑菌落

每种选择性增菌的培养物,分别用3mm接种环取一环,划线接种于

·亚硫酸铋琼脂(BS)琼脂平板,36℃±1℃培养40h~48h

·木糖赖氨酸脱氧胆盐琼脂(XLD)琼脂平板(或HE琼脂平板、沙门氏菌显色培养基平板),36℃±1℃培养18h~24h

观察各个平板上生长的菌落形态是否符合表中的菌落特征。

5、 生化鉴定——从“可疑菌落”进一步确认

  1. 初步判定——三糖铁和赖氨酸脱羧酶试验

挑取4个以上典型或可疑菌落,接种三糖铁琼脂(TSI)和赖氨酸脱羧酶试验培养基。同时挑取相同菌落划线营养琼脂(NA)平板进行纯化,36℃±1℃培养16h-24h。试验的结果及初步判断见表2。

注:

·挑取的菌落宜分别来自不同选择性增菌液的不同分离琼脂。

·在进行赖氨酸脱羧酶试验时,要挑取同一个待检菌落同时接种对照管,接种后均需滴加无菌液体石蜡覆盖。

2. 进阶判定——靛基质、尿素酶、氰化钾、甘露醇、山梨醇和ONPG试验

如果初步生化试验结果判定为疑似沙门氏菌,则挑取纯化好的可疑菌落,再继续做靛基质、尿素酶、氰化钾生长试验。也可使用生化鉴定试剂盒或微生物生化鉴定系统,能同时操作完成初步判定试验和进阶判定试验。

试验的结果及判断见下表。

在进行氰化钾试验时,要注意:

·同时接种对照管,接种后在均需滴加无菌液体石蜡覆盖。

·氰化钾为剧毒物质,在操作该试验时应做好个人防护。

·废弃处理:试验结束后,加入0.5 mL 40%氢氧化钾溶液和数粒硫酸亚铁,反应数小时后,121℃高压灭菌30 min。

6、 培养基原理与注意事项

沙门氏菌检测涉及多种培养基,不同培养基承担着不同的检测作用。

从这些培养基的使用要求可以看出,培养基的配制、灭菌、添加剂处理以及保存条件,都会对实验操作提出一定要求。

对于检测工作量较大的实验室而言,如何在满足标准要求的同时,减少繁琐的培养基制备步骤,也是提高检测效率的重要环节。

7、 标准化培养基,让检测流程更简单

从预增菌、选择性增菌到分离培养,再到后续生化鉴定,沙门氏菌检测涉及多个环节。实验室自行配制培养基时,需要经历称量、溶解、灭菌、添加剂处理、分装及保存等操作,不仅流程繁琐,也对实验人员的操作规范性提出了要求.

围绕GB 4789.4-2024沙门氏菌检验,逗点生物提供覆盖检验全流程的产品解决方案,实验室可按需选择合适的培养基及产品形式。同时,配套的添加剂与试剂盒也能够帮助实验人员更加高效地完成相关检测。

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