针对《BJS202505调味品、豆制品、肉制品等食品中红2G、二甲基黄、二乙基黄的测定》标准，逗点生物选取了豆皮和腊肠2种食品基质完成了方法验证工作，方法验证结果显示，加标回收率均大于85%。
一、样品前处理
1、二甲基黄和二乙基黄
提取： 称取2g试样于50mL离心管中，加入10mL乙腈，涡旋混匀1min，超声提取10min，10000r/min离心10min，上清液转移至20mL容量瓶中；残渣再加入5mL乙腈，重复提取一次，合并两次提取液，用乙腈定容至刻度，混匀，待净化。
净化： QuEChERS净化管（货号：COQ015132H）加入2mL水，涡旋混匀活化后，准确移取10mL待净化液于离心管中，涡旋1min，4000 r/min离心5min。
盐析： 取净化后的全部上清液于装有1.5g无水硫酸镁和0.5g氯化钠的离心管（货号：COQ015147H）中，涡旋1min，4000 r/min离心5min。
浓缩与复溶： 取盐析后的上清液至氮吹管中，40℃浓缩至近干，精密加入1mL 乙酸铵（10mmol/L）：乙腈=1：1溶液复溶，过0.22μm亲水PTFE滤膜，上机测试。
标准工作曲线： 称取空白基质2g共6份于50mL离心管中，分别加入适量二甲基黄和二乙基黄混合中间溶液（100ng/mL）40μL、80μL，混合中间溶液（400ng/mL） 40μL、80μL、100μL，按照上述“提取、净化、盐析、浓缩与复溶”步骤操作，得到浓度为2ng/mL、4ng/mL、8ng/mL、16ng/mL、20ng/mL的工作曲线。
备注：（1）10mmol/L乙酸铵溶液：称取乙酸铵0.770g，用水溶解并稀释至1000mL。
2、红2G
提取：准确称取试样2g于50mL离心管中，加入氨水乙醇溶液10mL，涡旋混匀1min，超声10min，10000r/min离心10min，上清液转移至20mL容量瓶中，残渣再加入5mL氨水乙醇溶液重复提取一次，合并两次上清液，用氨水乙醇溶液定容至刻度线，混匀，准确移取10mL提取液60℃氮吹至约1mL，加入10mL 5%甲醇水溶液超声涡旋复溶，做为待净化液。
净化：Copure®合成着色剂WAX专用柱，150mg/6mL（货号：COPWAX6150）
活化：使用前依次用6mL甲醇、6mL 水进行活化，保持柱体湿润；
上样：全部待净化液过柱，弃去流出液；
淋洗：依次用6mL水和6mL甲醇淋洗小柱，弃去流出液；
洗脱：用10mL 2%氨化甲醇分2次洗脱，收集洗脱液；
氮吹复溶：将洗脱液于40℃下氮吹至近干，精密加入1mL 乙酸铵（10mmol/L）：乙腈=1：1溶液复溶，过0.22μm亲水PTFE滤膜，上机测试。
标准工作曲线： 称取空白基质2g共6份于50mL离心管中，分别加入适量红2G中间溶液（1μg/mL）50μL、100μL，混合中间溶液（5μg/mL）40μL、80μL、100μL，按照上述“提取、净化、浓缩与复溶”步骤操作，得到浓度为25ng/mL、50ng/mL、100ng/mL、200ng/mL、250ng/mL的工作曲线。
备注：
（1）氨水乙醇溶液：量取氨水20mL，无水乙醇70mL，用水稀释至1000mL。
（2）建议验证滤膜对红2G，二甲基黄和二乙基黄的吸附情况。
二、仪器条件
2.1 二甲基黄和二乙基黄色谱参考条件
2.1.1液相色谱条件
仪器：仪器：UPLC-MS/MS（Thermo Fisher TSQ Endura）
色谱柱：Commasil® AQ-C18色谱柱 3.0mm×150mm,1.8μm （货号：HAQC18422）；
流动相：A：10mmol乙酸铵水溶液（含0.1%甲酸） B：乙腈
洗脱方式：梯度洗脱，见表1；柱温：40℃
2.1.2 质谱参考条件
离子源：HESI ，电喷雾电压：3500 V ；
鞘气压力：40 arb ，辅气压力：8 arb ；
离子传输管：300 ℃ ，辅气温度：300 ℃
2.2 红2G色谱参考条件
2.2.1液相色谱参考条件
仪器：仪器：UPLC-MS/MS（Thermo Fisher TSQ Endura）
色谱柱：Commasil® AQ-C18色谱柱 3.0mm×150mm,1.8μm
（货号：HAQC18422）；
流动相：A：10mmol乙酸铵水溶液 B：乙腈
洗脱方式：梯度洗脱，见表2；柱温：40℃
2.2.2 质谱参考条件
离子源：HESI ，电喷雾电压：3500 V ；
鞘气压力：40 arb ，辅气压力：8 arb ； 离子传输管：300 ℃ ，辅气温度：300 ℃
三、实验结果
3.1样品加标结果表
3.2 色谱图
四、订购信息
