《GB 5009.22-2016 食品安全国家标准 食品中黄曲霉毒素B族和G族的测定》

收获后的花生在流通和储藏过程中,容易受到霉菌的污染而发生霉变。其中,黄曲霉毒素在霉变花生中常被检出。

花生受到黄曲霉毒素B1(AFB1)污染后不仅会降低花生的营养和商业价值,更重要的是影响花生及其制品的可食性和安全性。

免疫亲和法具有方法准确、回收率高、精密度好等优点。逗点生物结合自身产品优势,建立了免疫亲和-高效液相色谱串联质谱法测定花生中AFB1含量的方法。

试样经提取后,经免疫亲和柱净化,经质谱分析,同位素内标法定量。经验证,加标回收率范围90-110%,RSD值小于5%,满足测试要求。

一、样本前处理

1.1提取

花生经粉粹后,称取样本5.0 g(精确至0.01 g)于50 mL离心管(带盖)中,加入100 μL同位素内标工作液(10 ng/mL)。加入20 mL乙腈水溶液(84+16),涡旋振荡提取20 min,8000 r/min离心5.0 min。取4.0 mL提取滤液,加入20 mL PBS溶液,混匀待净化。

SDC-3000-D 多管旋涡混匀仪

1.2净化

将免疫亲和柱连接于固相萃取装置上,将上述全部待净化稀释液过Copure®黄曲霉毒素B1免疫亲和柱(货号:COAFMB103),流速控制在1~2滴/秒。

然后依次加入5.0 mL PBS缓冲溶液和5.0 mL一级水淋洗小柱,弃去全部流出液,压干。用1.0 mL甲醇进行洗脱,关闭阀门浸泡30 s,然后洗脱至进样小瓶中,LC-MS/MS测试。

1.3过程空白实验

不称取试样,按上述步骤进行实验。

二、仪器条件

液相色谱柱

色谱柱:Commasil® T-C18

(2.1 mm×100 mm,3 μm)

流动相:A:5 mmol/L乙酸铵溶液  

B:甲醇(含0.1%甲酸)

流速:0.3 mL/min   

柱温:30℃   

进样量:5 μL

洗脱程序:梯度洗脱表1

表1 梯度洗脱程序

离子源:HESI     

扫描方式:正离子模式(ESI+)

鞘气压力:30 arb   

辅气压力:8 arb    

离子传输管:300 ℃    

辅气温度:350 ℃

表2 组分名称、及特征离子一览表(*为定量离子)

三、 实验测试结果

表3 花生中黄曲霉毒素B1加标回收实验结果
图1 黄曲霉毒素B1校准点外标和同位素内标的定量离子提取色谱图(1.0 μg/L)
图2 花生中黄曲霉毒素B1外标和同位素内标的定量离子提取色谱图(加标浓度1.00 μg/kg)

四、订购信息

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