经逗点生物技术人员与客户沟通，发现客户完全参照了国标的前处理方法和色谱条件。
我们建议：首先，要确保加入的衍生试剂足量，因为三氟乙酸挥发性强，放置时间久会对黄曲霉毒素B1的衍生化效果有影响；其次，个别仪器流动相设置等度程序也会出现黄曲霉毒素B1不出峰的现象。客户根据逗点生物的建议，排除了三氟乙酸的影响，再调整梯度程序进行洗脱，问题解决。
案例二：广州某第三方反馈：使用Copure®免疫亲和柱测赭曲霉毒素A，回收率超过120%。经与客户沟通，发现客户上机时，使用的溶剂与流动相不同，问题可能来自于基质效应。客户根据逗点生物的建议，采用初始流动相复溶上机，问题解决。
案例三：深圳某检测机构反馈：使用Copure®呕吐毒素免疫亲和柱，做空白加标，回收率几乎为0。经与客户沟通，发现客户配制呕吐毒素标液时未使用流动相，而是使用了浓度较高的甲醇溶液，过高的甲醇浓度破坏了抗原和抗体的结合，导致无回收。客户根据逗点生物的建议，使用流动相配制标液重新过柱，问题解决。
根据逗点生物的经验，一般呕吐毒素上柱时，要求溶液中甲醇的浓度不宜超过5%，黄曲霉毒素B1和总量等甲醇浓度不能高于25%。
案例四：东莞某检测机构咨询：使用Copure®免疫亲和柱测黄曲霉毒素总量，用2 mL甲醇洗脱，抽干与不抽干回收率差异很大，是什么原因？为何固相萃取柱使用时很少抽干，免疫亲和柱却要抽干？固相萃取方法在洗脱时，洗脱液用量通常为2-5倍的柱床体积，试剂用量比较大，洗脱比较充分。而免疫亲和柱的洗脱液用量一般比较小，如果不抽干的话，会有部分洗脱液残留在柱内，不能全部流出，导致回收率变低。另外，洗脱过程的流速也需要控制，一般建议1滴/秒。
案例五：广东省某第三方咨询：使用免疫亲和时，柱内的缓冲液是否需要排出？过柱过程中为何要控制流速？柱内缓冲液是否提前排出对检测结果影响不大。我们建议，不必排出柱内的缓冲液，将提取液直接上柱即可。
速度过快可能导致检测结果偏低，因此，上柱、洗脱过程的流速建议控制在1滴/秒，淋洗过程流速控制在1-2滴/秒。
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