一、实验目的

本研究利用固相萃取法作为样品的前处理方法,HPLC法作为分析方法,检测茶叶中合成着色剂的残留。该方法可简化样品的前处理过程,节省有机溶剂的使用,操作简便。

二、实验目标物

柠檬黄(CAS: 1934-21-0),苋菜红(CAS:915-67-3),胭脂红(CAS:2611-82-7),
日落黄(CAS: 2783-94-0),诱惑红(CAS: 25956-17-6),亮蓝(CAS: 3844-45-9)。

三、应用范围

本方法适用于茶叶中合成着色剂含量的HPLC检测及确证。

四、实验材料

biocomma® Copure® 聚酰胺小柱 500 mg/6 mL(Cat. No. COPACR66)。

五、实验步骤

1、样品提取
准确称取2.0 g红茶茶叶置于50 mL离心管中,加入20mL水,于振荡器中振荡提取30 min,4000 r/min 离心5 min,上层清液备用。

2、SPE柱净化
(1)活化:聚酰胺柱使用前用5 mL甲醇活化,5 mL水平衡。
(2)上样和洗脱:取5 mL备用液过柱,弃去流出液;用3 mL水淋洗,再用足量甲醇-甲酸溶液(6:4,v/v)淋洗至流出液透明,弃去流出液,抽干小柱;用5 mL 5%氨水甲醇洗脱,收集洗脱液。(整个上样、洗脱过程控制流速在1 mL/min内)。
(3)上机测试:将洗脱液定容至5 mL,取1 mL经0.22 μm水系滤膜过滤,供上机测试。

3、HPLC条件
设备:Waters Alliance 2695
色谱柱:InertSustain-C18 (4.6 mm×250 mm, 5 μm)
检测器:Waters 2996 紫外检测器
检测波长:254 nm
流动相:A:甲醇 B:0.02 mol/L乙酸铵缓冲溶液
表1 梯度洗脱条件


流速:1.0 mL/min
进样体积:20 μL

六、实验结果

1、10.0 mg/kg茶叶中合成着色剂的添加回收结果
表2 10.0 mg/kg茶叶中合成着色剂的添加回收结果


2、 添加水平为10.0 mg/kg茶叶中合成着色剂检测的液相色谱图


图1 添加水平为10.0 mg/kg茶叶中合成着色剂检测的液相色谱图

本方法回收率和RSD满足标准要求。

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