实验导读
苏丹红又名苏丹(Sudan)，是一种化工染色剂，主要用于油彩、机油、蜡和鞋油等产品的染色。用苏丹红染色后的食品颜色鲜艳且不易褪色，能够引起人们强烈的食欲，所以很多不法商贩将苏丹红添加到食品当中。
苏丹红被国际癌症研究机构(IARC)划分为潜在遗传毒性物质和致癌物质，它们的降解产物也被认为具有致癌性。因此，欧盟(EU)委员会决议强制要求对辣椒粉以及含有辣椒粉的产品进行苏丹红检测，包括苏丹红 I 号、 II 号、 III 号和 IV号 。
实验部分
一、实验目的
本研究利用固相萃取法作为样品的前处理方法，HPLC法作为分析方法，检测辣椒粉中苏丹红的含量。该方法可简化样品的前处理过程，节省有机溶剂的使用，操作简便。
二、实验目标物;
苏丹红I(CAS:842-07-9)、苏丹红II(CAS:3118-97-6)、苏丹红III(CAS:85-86-9)、苏丹红IV(CAS:85-83-6)
三、适用范围
本方法适用于辣椒粉中苏丹红检测的HPLC检测及确证。
四、实验材料
biocomma® Copure® 苏丹红分子印迹专用柱(Cat. No.COMIPSD6500)。
五、实验方法
1、样品提取
准确称取辣椒粉0.5 g于15 mL离心管中，加入5 mL正己烷，涡旋混合1 min，超声5 min，3000 r/min离心5min，取上清液；上述步骤重复提取4次，合并所有上清液，于40 ℃下氮吹浓缩至约4 mL，待净化。
2、SPE净化
(1)活化：苏丹红固相萃取柱使用前用5 mL正己烷活化。
(2)上样和洗脱：往固相萃取柱中加入待净化液；再加入5 mL正己烷淋洗，弃去流出液，再加5 mL乙酸乙酯进行洗脱，收洗脱液。
(3)重新溶解：洗脱液40℃氮吹近干，1 mL乙腈定容，涡旋1 min，经滤膜过滤供HPLC测试。
3、HPLC条件
设备：Waters Alliance 2695
色谱柱：CommaSep® ODS (4.6 mm×150 mm, 5 μm)
检测器：Waters 2487 紫外检测器
波长：478 nm
梯度洗脱：A：乙腈 B：0.1 %甲酸水溶液
六、实验结果
1、5 .0 mg/kg辣椒粉中苏丹红的添加回收结果
2、添加水平为5.0 mg/kg苏丹红标准液相色谱图
图1 添加水平为 5.0 mg/kg苏丹红标准液相色谱图
苏丹红I ：5.973min 苏丹红 II ：9.629min
苏丹红III ：11.865min 苏丹红IV ：17.011min
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