一、实验目的
本研究利用固相萃取法作为样品的前处理方法，HPLC法作为分析方法，检测饲料中硝基呋喃类药物的含量。该方法可简化样品的前处理过程，节省有机溶剂的使用，操作简便。
二、实验目标物
呋喃唑酮 (CAS:67-45-8)。
三、应用范围
本方法适用于饲料中硝基呋喃类药物的检测的HPLC检测及确证。
四、参考标准
农业部1486号公告-8-2010 《饲料中硝基呋喃类药物的测定 高效液相色谱法》。
五、实验材料
biocomma® Copure® MCX固相萃取柱60 mg/3 mL (Cat. No. COMCX360)。
六、实验步骤
1、样品提取
准确移取饲料1.0 g于50 mL离心管中加入25 mL乙腈，涡旋1 min分散均匀，65℃超生提取15 min，每隔5min手摇一次。3800 r / min离心15 min。取上清液5 mL于100 mL鸡心瓶中，50℃ 旋转蒸发至干。往鸡心瓶中加2%甲酸水溶液5 mL，超声2min，涡动1min充分溶解，备用。
2、SPE柱净化
(1)活化：MCX固相萃取柱使用前用3mL甲醇、3mL 2%甲酸水溶液活化。
(2)上样和洗脱: 往固相萃取柱中加入2%甲酸水溶液提取备用液，弃去流出液；加入3mL水淋洗，弃去淋洗液；3mL固相萃取柱洗脱液（1%氨水水溶液：甲醇=3：7）洗脱收集洗脱液(整个上样淋洗洗脱过程中流速保持<1mL/min)。
(3)重新溶解: 50 ℃缓慢氮气流条件下吹至近干，加1 mL流动相复溶，0.22μm滤膜过滤，滤液上机测试。
3、HPLC条件
设 备：Waters Alliance 2695
色谱柱 ：Welch Ultimate XB-C18 (4.6×250mm)
检测器 ：Waters 2487 紫外检测器
流动相 ： A：乙腈 B：0.05% 乙酸铵溶液
洗脱方式： 梯度洗脱
表1: 梯度洗脱条件
流速：1.0 mL/min
检测波长：365 nm
进样体积:20 μL
七、实验结果
1、2 mg/kg饲料中呋喃唑酮的添加回收结果
表1 2 mg/kg饲料中呋喃唑酮的添加回收结果
2、添加水平为2 mg/kg饲料中呋喃唑酮检测的液相色谱图
图1 添加水平为2 mg/kg饲料中呋喃唑酮检测的液相色谱图
本方法回收率和RSD满足标准要求。