一、实验目的

本研究利用固相萃取作为样品前处理方法,HPLC作为分析方法,检测牛奶样品中的氯霉素残留水平。该方法操作简便,可简化样品前处理过程,减少有机溶剂的使用。

二、实验目标物

氯霉素(CAS:56-75-7)。

三、应用范围

本方法适用于动物源性食品中氯霉素的检测的HPLC检测及确证。

四、参考标准

《GB/T 22338-2008 动物源食品中氯霉素类药物残留量测定》。

五、实验材料

biocomma® Copure® C18固相萃取柱500mg/6mL(Cat.No.COC186500)。

六、实验方法

1、样品提取
准确称取牛奶5 g(精确到0.001 g),加入乙酸乙酯15 mL,涡旋振荡1 min,摇床振荡10 min。3000 r/min转速离心10 min。将上清液转移至试管中,于45 ℃氮吹吹干,用5 mL乙腈-水溶液(5:95, v/v)溶解,待净化。

2、SPE柱净化
(1)活化:C18固相萃取柱使用前依次使用5 mL甲醇和5 mL水活化。
(2)上样和洗脱:将待净化液加入已活化好的固相萃取柱中,以1 mL/min的流速过柱,弃去滤液。用2×4 mL乙腈-水溶液(5:95, v/v)淋洗固相萃取柱,弃去淋洗液,抽干10 min。用8 mL乙酸乙酯洗脱固相萃取柱,收集洗脱液。
(3)重新溶解:洗脱液于45 ℃氮吹吹干,用1 mL乙腈-水溶液(2:8, v/v)定溶,0.22 μm微孔滤膜过滤,供高效液相色谱测定。

3、HPLC条件
设备:Waters Alliance 2695
色谱柱:Welch Ultimate XB-C18 (4.6X250 mm)
检测器:Waters 2487 紫外检测器
检测波长:268 nm
流动相:A:水 B:甲醇
洗脱方式:等度洗脱
表1 等度洗脱条件


流速:1 mL/min
进样体积:20 μL

七、实验结果

1、牛奶基质中氯霉素的0.5mg/kg添加回收结果
表2 牛奶基质中氯霉素的0.5mg/kg添加回收结果


2、 添加水平为0.5mg/kg牛奶基质中氯霉素检测色谱图


图1 添加水平为0.5mg/kg牛奶基质中氯霉素检测色谱图

本方法回收率和RSD满足标准要求。

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