本方案采用Copure® HLB-lim

阿莫西林(Amoxicillin),属于青霉素类β-内酰胺抗生素,为半合成的耐酸广谱青霉素类抗菌素。阿莫西林的不当或过量使用都会造成其在动物性食品中的残留,食用后会导致人体内白血球降低,影响内脏功能,发生脏器损害等。

本方案采用0.2 %甲酸乙腈:水=80:20(V:V)溶液提取,Copure® HLB-lim净化,液相色谱-串联质谱分析,建立了对动物猪肉中阿莫西林药物残留量的测定方法,通过加标实验验证,回收率和精密度均能满足标准要求。

一、提取

准确称取粉碎均匀的猪肉样品1.00 g于干净离心管中,加入5 mL 0.2 %甲酸乙腈:水=80:20(V:V)溶液,涡旋混匀后超声提取20 min,8000 r/min离心5 min,待净化。

SDC-3000-D多管旋涡混匀仪

二、净化

取2.5 mL上述上清液至Copure® HLB-lim柱,收集全部流出液,流出液氮吹近干后,用定溶液(475 mL水+25 mL乙腈+1.5 mL冰乙酸)定容至1 mL,过滤膜上机测试。

三、 基质曲线的制备

称取7 个阴性1.00 g(精确至0.01 g)试样至50 mL离心管中,加入相应体积的阿莫西林使用液,样本中的阿莫西林浓度分别为1.0、2.0、4.0、10、20、30、40 μg/kg。按上述前处理方法进行提取净化,最后定容过滤膜上机测试。

四、 仪器条件

4.1色谱条件

仪器:UPLC-MS/MS

(Thermo Fisher TSQ Endura)

色谱柱:Commasil® C18

 (2.1 mm×100 mm, 1.7 μm)

流动相:A:0.1%甲酸水  B:乙腈

洗脱方式:梯度洗脱,见表1

表1 梯度洗脱程序

流速:0.400 mL/ min

柱温:35 ℃

进样量:5 μL

4.2质谱条件

离子源:HESI          电喷雾电压:3500 V

鞘气压力:28 arb       辅气压力:5 arb

离子传输管:380 ℃     辅气温度:420 ℃

表2 组分名称、保留时间及特征离子一览表(*为定量离子)

五、实验结果

5.1线性范围

表3  阿莫西林线性关系、相关系数

5.2加标回收

表4  阿莫西林加标回收率
图1 添加水平为10 μg/kg时猪肉中阿莫西林提取离子图

六、 订购信息

本方案所采用的产品&设备如上表所示

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