一、实验目的
本研究利用固相萃取法作为牛奶样品中三聚氰胺检测的前处理方法，HPLC法作为检测手段。Copure™ MCX(60mg/3mL)柱净化效果良好，回收率满足测试要求，重现性好，与知名厂商同型号柱性能相当。
二、实验目标物
三聚氰胺 (CAS:108-78-1)。
三、应用范围
本方法适用于食品中三聚氰胺的HPLC检测及确证。
四、参考标准
《GB/T 22388-2008 原料乳与乳制品中三聚氰胺检测方法》。
五、实验材料
biocomma® Copure® MCX固相萃取柱60mg/3mL(Cat.No.COMCX360)；W品牌MCX固相萃取柱60mg/3mL。
六、实验方法
1、样品提取
称取2.0ｇ试样(精确至0.001 g)于50 mL离心管中，加入15 mL 1%三氯乙酸溶液和5 mL乙腈，超声提取10 min，再振荡提取10 min，4000 r/min离心10 min。上清液经三氯乙酸溶液润湿的滤纸过滤后，用三氯乙酸溶液定容至25 mL，移取5 mL滤液，加入5 mL水混匀后做待净化液。
2、SPE柱净化
(1)活化：使用前依次用3 mL甲醇、5 mL水活化柱子。
(2)上样和洗脱：将待净化液转移至固相萃取柱中。依次用3 mL水、3 mL甲醇洗涤，抽至近干后，用6 mL5%氨化甲醇溶液洗脱。整个固相萃取过程流速不超过1 mL/min。
(3)重新溶解：洗脱液于50 ℃下用氮气吹干，残留物用1 mL流动相定容，涡旋混合1 min，过微孔滤膜后，供HPLC测定。
3、HPLC条件
设备：Waters Alliance 2695
检测器：Waters 2487 双波长检测器；检测波长：240 nm
色谱柱：Welch Ultimate XB-C18 (4.6X250mm, 5 μm)
流动相：A：离子对试剂缓冲液(准确称取2.10 g柠檬酸和2.16 g辛烷磺酸钠，加入约980 mL水溶解，调节PH至3.0后，定溶至1 L备用) B：乙腈。
洗脱方式：等度洗脱, A : B=80 : 20
柱温：室温
进样体积：20 μL
流速：1 mL/min
七、实验结果
1、2.5mg/kg牛奶基质中三聚氰胺的添加回收结果
表1 2.5mg/kg牛奶基质中三聚氰胺的添加回收结果
表2 W品牌MCX柱2.5mg/kg牛奶基质中三聚氰胺的添加回收结果
2、添加水平为2.5mg/kg牛奶基质中三聚氰胺检测色谱图
图1 添加水平为2.5mg/kg牛奶基质中三聚氰胺检测色谱图
本方法回收率和RSD满足标准要求。