一、实验目的

本研究利用固相萃取法作为牛奶样品中三聚氰胺检测的前处理方法,HPLC法作为检测手段。Copure™ MCX(60mg/3mL)柱净化效果良好,回收率满足测试要求,重现性好,与知名厂商同型号柱性能相当。

二、实验目标物

三聚氰胺 (CAS:108-78-1)。

三、应用范围

本方法适用于食品中三聚氰胺的HPLC检测及确证。

四、参考标准

《GB/T 22388-2008 原料乳与乳制品中三聚氰胺检测方法》。

五、实验材料

biocomma® Copure® MCX固相萃取柱60mg/3mL(Cat.No.COMCX360);W品牌MCX固相萃取柱60mg/3mL。

六、实验方法

1、样品提取
称取2.0g试样(精确至0.001 g)于50 mL离心管中,加入15 mL 1%三氯乙酸溶液和5 mL乙腈,超声提取10 min,再振荡提取10 min,4000 r/min离心10 min。上清液经三氯乙酸溶液润湿的滤纸过滤后,用三氯乙酸溶液定容至25 mL,移取5 mL滤液,加入5 mL水混匀后做待净化液。

2、SPE柱净化
(1)活化:使用前依次用3 mL甲醇、5 mL水活化柱子。
(2)上样和洗脱:将待净化液转移至固相萃取柱中。依次用3 mL水、3 mL甲醇洗涤,抽至近干后,用6 mL5%氨化甲醇溶液洗脱。整个固相萃取过程流速不超过1 mL/min。
(3)重新溶解:洗脱液于50 ℃下用氮气吹干,残留物用1 mL流动相定容,涡旋混合1 min,过微孔滤膜后,供HPLC测定。

3、HPLC条件
设备:Waters Alliance 2695
检测器:Waters 2487 双波长检测器;检测波长:240 nm
色谱柱:Welch Ultimate XB-C18 (4.6X250mm, 5 μm)
流动相:A:离子对试剂缓冲液(准确称取2.10 g柠檬酸和2.16 g辛烷磺酸钠,加入约980 mL水溶解,调节PH至3.0后,定溶至1 L备用) B:乙腈。
洗脱方式:等度洗脱, A : B=80 : 20
柱温:室温
进样体积:20 μL
流速:1 mL/min

七、实验结果

1、2.5mg/kg牛奶基质中三聚氰胺的添加回收结果
表1 2.5mg/kg牛奶基质中三聚氰胺的添加回收结果


表2 W品牌MCX柱2.5mg/kg牛奶基质中三聚氰胺的添加回收结果


2、添加水平为2.5mg/kg牛奶基质中三聚氰胺检测色谱图


图1 添加水平为2.5mg/kg牛奶基质中三聚氰胺检测色谱图

本方法回收率和RSD满足标准要求。

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