逗点生物推出了Copure® 96孔PPT蛋白沉淀过滤板,它采用自主设计的过滤材料,能有效地阻截蛋白沉淀。实验过程中仅需在孔中依次加入蛋白沉淀剂和液体生物样本(如血清、血浆等),经充分混合、蛋白沉淀后,再施加正压或离心收集流出液,即得到可供上机测试的样品。

本文使用乙腈(0.1%甲酸)作为沉淀剂,分析了血清中4种不同类型药物(去甲替林、酮基布洛芬、氟尼酸、吲哚洛尔)的含量;在1-10 ng/mL浓度下,加标浓度回收率在70-110%,RSD<8%,可以满足实际检测需求。

一、样品提取

取300μL的乙腈(0.1%甲酸)置96孔PPT蛋白沉淀过滤板中作为沉淀剂,加入100μL人血清样品,将96孔板封膜,置于接收板上,两板的96孔对准后于1500rpm涡旋5min使其混合均匀。

采用正压方法将蛋白沉淀完全的溶液全部过滤到96孔收集板中,收集板中得到滤液,封膜后上机检测。

注:使用正压仪器过滤时,压力推荐为1mL蛋白沉淀板:4~20Psi;   2mL蛋白沉淀板:10~100Psi

二、仪器设备

三、仪器条件

【色谱条件】

仪器:UPLC-MS/MS

(Thermo Fisher TSQ Endura)

色谱柱:Commasil® T-C18

 (2.1 mm×100 mm,3 μm)

流动相:A:水(0.1 %甲酸)   B:甲醇(0.1 %甲酸)

洗脱方式:梯度洗脱,见表1

流速:0.3 mL/min

柱温:35℃

进样量:5 μL

表1 梯度洗脱程序

【质谱条件】

离子源:HESI

电喷雾电压:3500 V

鞘气压力:40 arb

辅气压力:2 arb      

离子传输管:380 ℃

辅气温度:350 ℃

表2 组分名称及特征离子一览表(*为定量离子)

四、实验结果

表3  4种药物加标回收实验结果
图1 加标浓度为1ng/mL时血清中4种药物TIC色谱图

五、货号信息

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