一、实验目的
本研究利用分散固相萃取（QuEChERS）法作为样品的前处理方法，HPLC法作为分析方法，检测宠物食品中的抗氧化剂含量。该方法可简化样品的前处理过程，节省有机溶剂的使用，操作简便。
二、实验目标物
抗氧化剂BHA（CAS: 25013-16-5） 抗氧化剂BHT（CAS: 128-37-0）。
三、应用范围
本方法适用于宠物粮中的抗氧化剂含量检测的HPLC检测及确证。
四、参考标准
《BS EN 15662:2008 Foods of plant origin-Determination of pesticide residues using GCMS and/or LC-MS/MS following acetonitrile extraction/partition and clean-up by dispersive SPE-QuECHERS-method》。
五、实验材料
biocomma® Copure® QuEChERS 提取管50 mL（Cat. No. COQ050010），
biocomma® Copure® QuEChERS 净化管15 mL（Cat. No. COQ015020）。
六、实验步骤
1、样品提取
准确称取粉碎好的宠物粮（狗粮）2.0 g于50 mL 离心管中，加入8 mL水，涡旋1 min；加入10 mL乙腈，涡旋1 min；最后加入QuEChERS萃取盐包（4.0 g无水硫酸镁、1.0 g氯化钠、1.0 g柠檬酸钠、0.5 g柠檬酸氢二钠），用力振摇1 min，4000 r/min离心5 min。上层乙腈层待净化。
2、样品净化
取上层待净化乙腈层6 mL于15 mL QuEChERS净化管(900 mg MgSO4、150 mg PSA和15 mg GCB)中，涡旋 1 min，4000 r/min离心5 min。取上清液2 mL转移至另一试管中，40 ℃下氮吹至干，用1 mL乙腈复溶，过0.22 μm滤膜，待上机测试。
3、HPLC仪器条件
设备：Waters Alliance 2695
色谱柱：Phenomenex kinetex-C18 ( 4.6 mm×250 mm, 5 μm)
检测器：Waters 2996 DAD检测
检测波长：280 nm
流动相：A：0.1 %甲酸水 B：甲醇
洗脱方式：梯度洗脱
表1 流动相梯度洗脱程序
流速：1 mL/min
进样体积：20 μL
七、实验结果
1、5.0 mg/kg宠物粮中抗氧化剂的添加回收结果
表2 5.0 mg/kg宠物粮中抗氧化剂的添加回收结果
2、添加水平为5.0 mg/kg抗氧化剂检测的液相色谱图
图1 添加水平为5.0 mg/kg抗氧化剂检测的液相色谱图
本方法回收率和RSD满足标准要求。