黄曲霉素简介

黄曲霉毒素(AFT)是一种毒性很强的肝毒素, 可引起肝脏的急慢性损害, 同时还对肾脏等其他多种组织器官造成影响, 并具有致癌、致畸、致细胞突变的作用。 ATF广泛存在于玉米、麦类、稻谷等农产品以及坚果、花生和动物饲料中,近年来, 有陆续报道我国中草药材上ATF污染也很严重,。

为此,我国不断扩大对中药材中黄曲霉含量的检测领域,并制定相关检测标准以加强对中药材的质量管控。

黄曲霉毒素总量的测试方法

实验耗材: Copure®黄曲霉总量免疫亲和柱(货号:COAFMT103)

参照标准:《中国药典2015年版第四部》

实验部分

一、样品提取

准确称取5.0 g粉碎后决明子样品置于50mL离心管中,加入1 g氯化钠,加入25 mL 70%甲醇溶液,于涡旋仪上涡旋2min,在5000 r/min下离心5min,取5 mL上清液,用水定容至20 mL,过滤,取10 mL待净化。

二、免疫亲和柱净化

(1) 上样:将20 mL上样器连接于免疫亲和柱上端,取待净化液以1-2滴/秒的速度通过免疫亲和柱,弃掉流出的液体。

(2) 淋洗和洗脱:用20 mL水淋洗柱子,分两次淋洗,弃去流出的液体;抽干小柱;加入2×1 mL甲醇洗脱,抽干小柱,收集洗脱液。

(3) 重新溶解:洗脱液在45℃氮吹至近干,0.5 mL初始流动相复溶,混匀,经0.22 μm滤膜过滤,供上机测试。

三、仪器条件

仪器测试条件(仅供参考)

3.1 液相条件

仪 器:UPLC/MS/MS (Thermo Fiaher TSQ Endura )进样量: 4 μL
色谱柱:CommaSilTM HILIC(2.1mm×100 mm, 3 μm) 柱 温: 30 ℃
流动相:A:10 mmol/L 乙酸铵溶液 B:乙腈流 速: 0.3 mL/min

表1 梯度洗脱

时间/minA%B%
09010
36040
4.55545
6.53565
106040

3.2质谱条件

离子源:HESI,正离子监测电喷雾电压:3500 V
鞘气压力:2 arb辅气压力: 1 arb
离子传输管:275℃辅气温度:350℃
采集方式: 多反应监测(SIR)

四、实验结果

表2. 决明子中0.02 mg/kg黄曲霉B1,黄曲霉G1和0.007mg/kg黄曲霉B2,黄曲霉G2的添加回收结果

1决明子中的黄曲霉B1

图1. 添加水平为0.02 mg/kg决明子中的黄曲霉B1检测的LCMS/MS色谱图

2决明子中的黄曲霉 B2

图2. 添加水平为0.007 mg/kg决明子中的黄曲霉B2检测的LCMS/MS色谱图’

3决明子中的黄曲霉G1

图3. 添加水平为0.02 mg/kg决明子中的黄曲霉G1检测的LCMS/MS色谱图

4决明子中的黄曲霉G2

图4. 添加水平为0.007 mg/kg决明子中的黄曲霉G2检测的LCMS/MS色谱图

关于逗点

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