一、实验目的
本研究利用固相萃取法作为动物源性食品(动物肌肉和肝脏)中克伦特罗(clenbuterol)、沙丁胺醇(salbutamol)、莱克多巴胺(ractompamine)等3种β-受体激动剂的样本前处理净化方法，HPLC法作为检测手段。Copure™MCX(60mg/3mL)柱净化效果良好，回收率满足测试要求，重现性好，与知名厂商同型号柱性能相当。
二、实验目标物
克伦特罗(CAS:37148-27-9)、沙丁胺醇(CAS:18559-94-9)、莱克多巴胺(CAS:97825-25-7)。
三、应用范围
本方法适用于动物源性食品(动物肌肉和肝脏)中克伦特罗(Clen)、沙丁胺醇(Sal)、莱克多巴胺(Rac)等3种β-受体激动剂残留药物的检测。
四、参考标准
《GB/T 22286-2008 动物性食品中多种β-受体激动剂残留量的测定 液相色谱串联质谱法》。
五、实验材料
biocomma® Copure® MCX固相萃取柱60mg/3mL(Cat.No.COMCX360)；W品牌MCX固相萃取柱60mg/3mL。
六、实验方法
1、样品提取
称取2±0.01 g经捣碎的猪肉样品，于50 mL离心管中，加8 mL乙酸钠缓冲液(0.2 mol/L，pH=5.2)，充分混匀，再加50 μL β-葡萄糖醛苷酶/芳基硫酸酯酶，混匀后，37 ℃水浴水解12 h。振荡提取15 min， 4000 r/min离心10 min，取上清液4 mL于50 mL离心管中，并加入0.1 mol/L高氯酸溶液5 mL，混合均匀，用高氯酸调节pH到1±0.3。4000 r/min离心10 min后将全部上清液转移到50 mL离心管中，用10 mol/L氢氧化钠溶液调节pH到11。加入10 mL饱和氯化钠和10 mL异丙醇-乙酸乙酯(6:4, v/v)混合溶液，充分提取5 min，在4000 r/ min离心10 min。
转移全部有机相，在40 ℃水浴下氮吹干。加入5 mL乙酸钠缓冲液(0.2 mol/L，pH=5.2)，超声混匀，使残渣充分溶解后备用。
2、SPE柱净化
(1) 活化：MCX柱依次用3 mL甲醇和3 mL水活化。
(2) 上样和洗脱：取上述残渣溶液上柱，控制流速0.5 mL/min。后依次用2 mL水、2 mL 2%甲酸水、2 mL甲醇淋洗柱子并抽干，最后用2 mL5%氨化甲醇溶液洗脱柱子上的待测成分。
(3) 重新溶解：收集洗脱液，于40 ℃氮气吹干，准确加入1.0 mL 0.1%甲酸/水-甲醇(95:5，v/v)溶液溶解残余物，0.22 μm滤膜过滤，供高效液相色谱测定。
3、HPLC条件
设备：Waters Alliance 2695
色谱柱：Welch Ultimate XB-C18 (250×4.6mm Id，5 μm)
检测器：紫外249nm，荧光激发波长226nm，发射波长306nm
流动相：A:甲醇 B:0.1%甲酸水溶液
洗脱方式：梯度洗脱
表1 梯度洗脱条件
流速：1.0 mL/min
柱温：30 ℃
进样量：20 μL
七、实验结果
1、添加水平为1.0mg/kg猪肉基质中克伦特罗(Clen)、沙丁胺醇(Sal)、莱克多巴胺(Rac)等3种
β-受体激动剂的添加回收结果
表2 添加水平为1.0mg/kg猪肉基质中3种β-受体激动剂的添加回收结果
表3 W品牌同型号柱，添加水平为1.0mg/kg猪肉基质中3种β-受体激动剂的添加回收结果
2、添加水平为1.0mg/kg猪肉基质中三种β-受体激动剂检测色谱图
图1 沙丁胺醇和莱克多巴胺的荧光色谱图
图2 克伦特罗的紫外色谱图
本方法回收率和RSD满足标准要求。