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CommaSep® WCX96孔板用于血浆中儿茶酚胺类物质的提取与检测
研究背景及意义
CommaSep® WCX96孔板(MWCX9603)特别为血浆样品中的儿茶酚胺类物质而设计,适用于 LC-MS/MS 临床检测研究。儿茶酚胺类物质主要是由肾上腺髓质、交感神经、副神经节的嗜铬细胞合成分泌。嗜铬细胞瘤是一种罕见的疾病,主要发生于肾上腺髓质的嗜铬细胞,会引起儿茶酚胺分泌增加。因此,检测儿茶酚胺类物质具有重要的临床意义。
1 样本前处理
1.1 血浆样本的预处理:
移取250 µL血浆样品于1.5 mL的离心管中,加入250 µL浓度为50 mM的乙酸铵溶液,再加入内标工作溶液*。混合均匀,待用。
1.2 活化WCX板:
WCX96孔板需以此用200 µL甲醇和200 µL H2O预处理进行活化。
1.3 样品处理:
将混合均匀的待处理样品加入到经过预处理的样品加到WCX96孔板中。
1.4 淋洗净化:
加样后,依次使用200 µL浓度为20mM的乙酸铵和200 µL 50:50的乙腈:异丙醇对孔进行清洗。然后将WCX96孔板在正压的氮气条件下干燥30 s,以尽可能多地除去柱床中的溶剂。
1.5 洗脱:
使用2份50 µL含有2%甲酸的85:15 ACN:H 2 O,将目标化合物由WCX96孔板洗脱到96孔样品收集板中。
1.6 吹干复溶:
将收集板于氮气条件下进行吹干处理,吹干后用50 µL含0.1%甲酸的水溶液进行复溶。
1.7 上机检测:
将复溶液注入LC-MS/MS系统中进行检测。
备注:①内标工作液的浓度和体积可根据实验室的方法进行适当调整。
②标准曲线的前处理方法与样本相同。
2 仪器条件
仪器:FH-6000MD UPLC-MS/MS
色谱柱:CommaSil® PFP (2.1mm×50 mm, 3 μm)
柱温:45 ℃
进样量:5 μL
流动相:A:水(含0.1%FA) B:甲醇(含0.1%FA)
洗脱方式:梯度洗脱

表 1 流动相梯度洗脱条件
电喷雾电压:3500 V
鞘气压力:25 arb
辅气压力:1 arb
离子传输管:300 ℃
辅气温度:360 ℃
采集方式:多反应监测

表 2 各组分母离子和子离子检测的离子对参数
3 实验结果
3.1 标准品检测结果

3.2 血浆样本检测结果

左侧为某进口品牌的WCX处理的血浆样本上机检测结果,右侧为CommaSep® WCX96孔板(MWCX9603)处理的血浆样本上机检测结果。通过相同样本进行前处理,两者所得到的结果相近。
3.3 稳定性结果

关于逗点
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