一、实验目的
本研究利用固相萃取作为样品前处理方法，HPLC作为分析方法，检测化妆品样品中的氢化可的松的残留水平。该方法操作简便，可简化样品前处理过程，减少有机溶剂的使用。
二、实验目标物
氢化可的松(CAS:50-23-7)。
三、应用范围
本方法适用于化妆品中氢化可的松的检测的HPLC检测及确证。
四、参考标准
《GB/T 24800.2-2009 化妆品中四十一种糖皮质激素的测定 液相色谱/串联质谱法和薄层层析法》。
五、实验材料
biocomma® Copure® HLB固相萃取柱60 mg/3 mL(Cat.No.COHLB360)。
六、实验方法
1、样品提取
准确称取沐浴露0.2 g(精确到0.01 g)于10 mL具塞塑料离心管中，加入3 mL饱和的氯化钠溶液，涡旋振荡1 min使样品分散，准确加入2 mL乙腈，充分涡旋提取2 min，5000 r/min离心10 min，吸出上层清液于另一 50 mL具塞塑料离心管中，下层氯化钠溶液用2 mL乙腈重复提取步骤一次，合并二次乙腈提取液，往提取液中准确加入40 mL高纯水，混匀，加入10% 亚铁氰化钾水溶液0.2 mL，混匀，加入20% 乙酸锌水溶液0.2 mL混匀，5000 r/min离心10 min，上清液待净化。
2、SPE柱净化
(1)活化：HLB固相萃取柱使用前依次使用5 mL甲醇和10 mL水活化。
(2)上样和洗脱：将待净化液的样品溶液加入已活化好的固相萃取柱中，以1 mL/min的流速过柱，弃去滤液。用2×5 mL乙腈-水溶液(10:90, v/v)淋洗固相萃取柱，弃去淋洗液，用吸耳球吹出小柱中残留液。用4 mL甲醇洗脱固相萃取柱，收集洗脱液。
(3)重新溶解：洗脱液于40 ℃氮吹吹干，用2 mL甲醇-水溶液(5:5, v/v)定容，0.22 μm微孔滤膜过滤，供HPLC上机测试。
3、HPLC条件
设备：Waters Alliance 2695
色谱柱：Welch Ultimate XB-C18 (4.6 mmX250 mm, 5 μm)
检测器：Waters 2487 紫外检测器
检测波长：254 nm
流动相：A：乙腈 B：0.1%甲酸水溶液
洗脱方式：梯度洗脱
表1 梯度洗脱条件
流速：1 mL/min
进样体积：20 μL
七、实验结果
1、化妆品中氢化可的松的10mg/kg添加回收结果
表2 化妆品中氢化可的松的10mg/kg添加回收结果
2、 添加水平为10mg/kg化妆品中氢化可的松检测色谱图
图1 添加水平为10mg/kg化妆品中氢化可的松检测色谱图
本方法回收率和RSD满足标准要求。