一、实验目的
本研究利用固相萃取法作为样品的前处理方法，HPLC法作为分析方法，检测猪肉中激素含量。该方法可简化样品的前处理过程，节省有机溶剂的使用，操作简便。
二、实验目标物
醋酸甲羟孕酮(CAS:71-58-9)，睾酮（CAS:58-22-0）。
三、应用范围
本方法适用于猪肉中激素检测的HPLC检测及确证。
四、实验材料
biocomma® Copure® HLB固相萃取柱60 mg/3 mL(Cat. No. COHLB360)。
五、实验步骤
1、样品提取
准确称取猪肉5.0 g于50 mL离心管中加入水20 mL，甲醇5 mL，涡旋1 min，4500 r/min离心5 min，取上清液，备用。
2、SPE柱净化
(1)活化：HLB固相萃取柱使用前用3 mL甲醇、3 mL水活化。
(2)上样和洗脱：往固相萃取柱中加入提取备用液，弃去流出液；加入3 mL 35 %甲醇水溶液淋洗，弃去淋洗液，抽干小柱；加6 mL甲醇洗脱，收集洗脱液（整个上样、洗脱过程保持流速1mL/min）。
(3)重新溶解：40 ℃缓慢氮气流条件下吹至近干，用1 mL甲醇溶解，经0.22 μm滤膜重新过滤，供HPLC测定。
3、HPLC条件
设备：Waters Alliance 2695
色谱柱：Welch Ultimate XB-C18 (4.6 mm×250 mm, 5 μm)
检测器：Waters 2487 紫外检测器
检测波长：230 nm
流动相：A：乙腈 B：水
洗脱方式： 梯度洗脱
表1: 梯度洗脱条件
流速：1.0 mL/min
进样体积：20 μL
六、实验结果
1、1.0 mg/kg猪肉中激素的添加回收结果
表2 1.0 mg/kg猪肉中激素的添加回收结果
2、添加水平为1.0 mg/kg猪肉中激素检测的液相色谱图
图1 添加水平为1.0 mg/kg猪肉中激素检测的液相色谱图
本方法回收率和RSD满足标准要求。