一、实验目的
本研究利用固相萃取法作为样品的前处理方法，HPLC法作为分析方法，检测鱼肉中甲氧苄啶含量。该方法可简化样品的前处理过程，节省有机溶剂的使用，操作简便。
二、实验目标物
甲氧苄啶(CAS:738-70-5)。
三、应用范围
本方法适用于鱼肉中甲氧苄啶残留的HPLC检测及确证。
四、实验材料
biocomma® Copure® MCX固相萃取柱60 mg/3 mL(Cat. No. COMCX360)。
五、实验步骤
1、样品提取
准确称取鱼肉5.0 g于50 mL离心管中，加入三氯甲烷15 mL、甲醇14 mL、0.1 mol/L硫酸6 mL，涡旋2 min，4000 r/min离心3 min，取上清液加入250 mL的分液漏斗中，继续加甲醇14 mL，4000 r/min离心3 min，取上清液合并加入250 mL的分液漏斗中；分液漏斗中加入2 mL 2 mol/L氢氧化钾，加入30 mL二氯甲烷，振摇分层，取下层液，继续加入30 mL二氯甲烷，振摇分层，取下层液合并，于40 ℃旋蒸至近干，加6 mL 5 %乙酸水溶液溶解，待净化。
2、SPE柱净化
(1)活化：MCX固相萃取柱使用前用5 mL甲醇、5 mL 5 %乙酸水溶液活化。
(2)上样和洗脱：往固相萃取柱中加入待净化液，弃去流出液，加5 mL 5 %乙酸水溶液、5 mL甲醇淋洗，弃去淋洗液，抽干小柱；加15 mL 5 %氨化甲醇洗脱，收集流出液（上样、洗脱过程保持流速1 mL/min）。
(3)重新溶解：洗脱液40 ℃下氮吹至近干，用1 mL甲醇溶解，经0.22 μm滤膜过滤，供HPLC测定。
3、HPLC条件
设备：Waters Alliance 2695
色谱柱：Welch Ultimate XB-C18 (4.6 mm×250 mm, 5 μm)
检测器：Waters 2996 DAD检测器
检测波长：280 nm
流动相：A：甲醇 B：0.5 %高氯酸水溶液
洗脱方式：等度洗脱, A : B=30 : 70
流速：1.0 mL/min
进样体积：20 μL
六、实验结果
1、2.0 mg/kg鱼肉中甲氧苄啶的添加回收结果
表1 2.0 mg/kg鱼肉中甲氧苄啶的添加回收结果
2、添加水平为2.0 mg/kg甲氧苄啶检测的液相色谱图
图1 添加水平为2.0 mg/kg甲氧苄啶检测的液相色谱图
本方法回收率和RSD满足标准要求。