合成着色剂是指人工化学合成方法所制成的有机色素，因其色彩鲜艳、着色力强、稳定性好、生产成本低等特点广泛应用于食品工业，但有些生产企业为了改良食品感观色泽，超限量、超范围使用合成着色剂，可能会对人体肝脏产生一定影响。
逗点生物结合自身产品优势，按照国标建立了固相萃取-高效液相色谱法测定硬糖和水果罐头中11种合成着色剂含量的方法，样品经乙醇胺水提取后，经Copure® PWAX混合型弱阴离子交换柱净化，采用高效液相色谱仪结合紫外检测器测定。
经验证，11种合成着色剂在0.2μg/mL到20μg/mL范围内线性良好，R^2>0.995，加标回收率在80%-100%范围内，符合测试需求。
一、样品前处理
1.1样品提取
准确称取试样2g（精确至0.001g），置于50mL离心管中，先加入适量水(2mL~5mL)50℃水浴超声融化样品，再加入25mL乙醇氨水溶液，涡旋1min，50℃超声提取20min，8000转/分钟离心5min。取上清液置于50mL离心管中，残渣中再加入5mL~10mL乙醇氨水溶液重复提取至上清液无明显颜色，离心后合并上清液，用乙醇氨水溶液定容至50 mL，即得提取液。准确吸取提取液10mL，50℃氮气浓缩至2mL左右，分2~3次共加入10mL 5%甲醇水溶液溶解，调节pH至6.0左右，作为待净化液。
注：乙醇氨水溶液配制，量取无水乙醇700mL，加入4mL氨水，用水稀释并定容至1L，混匀。
1.2试样的净化
浓缩先依次用6mL甲醇和6mL水活化Copure® PWAX固相萃取柱（150mg/6mL，货号：COPWAX6150），保持柱体湿润，将待净化液注入柱中，控制流出液流速在1滴/秒，弃去流出液。再依次用6mL 2%甲酸水和6mL甲醇淋洗，弃去淋洗液，抽干小柱。最后用6mL 2%氨化甲醇洗脱，分两次加入，收集洗脱液，于50 ℃氮吹至近干。准确加入2mL pH=9的乙酸铵溶液溶解，过0.22μm 亲水PTFE滤膜，弃去2~5滴初滤液，取续滤液作为待测液。Copure® PWAX混合型弱阴离子交换柱150mg/6mL，货号：COPWAX6150
1.3空白实验
1.3.1过程空白：取一支洁净的50 mL离心管，不称取试样，按照上述1.1和1.2进行提取、净化，浓缩，取续滤液上机测试。
1.3.2空白本底实验：称取试样2 g（精确至0.001 g）按照上述1.1和1.2进行提取、净化，浓缩，取续滤液上机测试。
二、 标准系列工作液
分别精密移取11种着色剂混标中间液（100μg/mL）0.02mL、0.05mL、0.1mL、0.2mL、0.5mL、1.0mL、2.0mL于10mL容量瓶中，用水定容至刻线，摇匀，得标准系列工作液。浓度分别为0.20μg/mL、0.50μg/mL、1.0μg/mL、2.0μg/mL、5.0μg/mL、10.0μg/mL和20.0μg/mL。
三、仪器条件
仪器：ThermoFisher U3000液相色谱仪
色谱柱：Commasil® C18(4.6 mm×250 mm，5 μm)
流动相：A：20 mmol/L乙酸铵溶液 B：甲醇
洗脱方式：梯度洗脱，见表1
流速：1 mL/min
柱温：30 ℃
进样量：10 μL
检测器：紫外检测器
检测波长：415 nm、520 nm、610 nm
四、实验结果
五、注意事项
1）标准储备液：固体标物加水溶解，4°C下避光保存6个月。靛蓝标准溶液临用现配。
2）糖果样品提取时需要加2-5mL水将其融化，提取次数可根据提取液颜色变化而定。
3）过柱前测下样液的pH值，调节至6.0，因为PWAX属于混合型弱阴离子交换反相吸附柱，上样时需要酸性条件。
4）收集洗脱液玻璃氮吹管，可使氮吹时间减半。
5）50°C氮气浓缩至近干，准确加入2 mLpH为9.0的乙酸铵缓冲溶液复溶，酸性条件下赤藓红回收率低。
6）上机之前过滤所用的滤膜不得使用尼龙滤膜，因为尼龙的化学成分是聚酰胺，会吸附合成着色剂，要用亲水PTFE。
六、订购信息
