Copure® MCX在实际应用中，收到众多老师关于《GB/T 22388-2008 原料乳与乳制品中三聚氰胺检测方法 第一法 液相色谱法》测试过程中的宝贵意见，通过多番的技术交流和实验优化，现对该方法在三聚氰胺检测方面进行了验证。与国内外主流品牌进行比对，Copure® MCX的回收率与竞品相当，进一步证明了我们产品的可靠性和稳定性。
01 试样提取
1.1牛奶
称取2g牛奶于50mL离心管中，加入15mL1%的三氯乙酸溶液和5mL乙腈，超声10min，振荡10min，10000r/min离心10min，转移上清液到25mL容量瓶中，用1%的三氯乙酸溶液定容至25mL。准确移取5mL样液，加入5mL水混匀后做待净化液。
备注：①过滤纸容易造成损失；
②若样液稍微浑浊，可以考虑再次离心，避免上样过程中堵柱子。
1.2奶粉
称取2g奶粉于50mL离心管中，加入10mL1%的三氯乙酸溶液，5mL乙腈和2mL 5%的醋酸铅溶液，超声10min，振荡10min，10000r/min离心10min，转移上清液到25mL容量瓶中。残渣再加入6mL1%的三氯乙酸溶液，振荡10min进行二次提取，10000r/min离心10min，合并2次提取液，用1%的三氯乙酸溶液定容至25mL。准确移取5mL样液，加入5mL水混匀后做待净化液。
备注：①过滤纸容易造成损失；
②提取次数会影响回收率；
③若样液浑浊，可以考虑再次离心，避免上样过程中堵柱子。
02 SPE柱净化（Copure® MCX，60mg/3mL）
活化：使用前依次用3mL甲醇、5mL水活化柱子；
上样：将待净化液转移至固相萃取柱中；
淋洗：依次用3mL水、3mL甲醇洗涤；
洗脱：用6mL5%氨化甲醇洗脱，收集洗脱液。
重新溶解：洗脱液于50℃下氮气吹干，残留物用1mL流动相复溶，涡旋混合1min，过微孔滤膜后，供HPLC测定。
备注：整个固相萃取过程建议自然滴落，若加压控制流速不超过1mL/min。
03 仪器条件
设备：液相色谱仪；
色谱柱：CommaSil®C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）；
检测器：紫外检测器；
检测波长：240nm；
流动相：A:离子对试剂缓冲液（准确称取2.10g柠檬酸和2.16g辛烷磺酸钠，加入约980mL水溶解，调节PH至3.0后，定容至1L备用）；B:乙腈；
洗脱方式：等度洗脱，A:B=90:10；
柱温：30℃；
进样体积：20μL；
流速：1mL/min。
04测定结果
4.1测定谱图
4.2实验结果
表1 2mg/kg纯牛奶基质中三聚氰胺的添加回收结果
表2 2mg/kg奶粉基质中三聚氰胺的添加回收结果
05实验过程分析
5.1 过滤纸的损失
选择牛奶样品，添加水平为2mg/kg考察过滤纸对回收率的影响。
方法1：严格按照GB/T 22388-2008标准处理：样液经三氯乙酸溶液湿润的滤纸过滤后，用三氯乙酸溶液定容至25mL。
方法2：提取结束后，上清液到25mL容量瓶中，直接用三氯乙酸溶液定容至25mL。
方法1和方法2的差别在于是否过滤纸，其它步骤均一致，由测试结果可以看出，样液经滤纸过滤后会存在一定的损失。测试结果如下：
表3 考察过滤纸对回收率的影响
5.2 提取次数
在实验过程中发现对于牛奶样品，一次提取就能提取充分；而对于奶粉样品，提取次数会影响回收率，提取2次才能提取充分。从5.1可以知道过滤纸会有一定的损失，因此在验证提取次数因素时选择不过滤纸。
选择普通奶粉作为样品，添加水平为2mg/kg考察提取次数对回收率的影响。
方法1（提取1次）：称取2g牛奶于50mL离心管中，加入15mL1%的三氯乙酸溶液和5mL乙腈，超声10min，振荡10min，10000r/min离心10min，转移上清液到25mL容量瓶中，用1%的三氯乙酸溶液定容至25mL。其余步骤与标准一致。
方法2（提取2次）：称取2g奶粉于50mL离心管中，加入10mL1%的三氯乙酸溶液，5mL乙腈和2mL 5%的醋酸铅溶液，超声10min，振荡10min，10000r/min离心10min，转移上清液到25mL容量瓶中。残渣再加入6mL1%的三氯乙酸溶液，振荡10min进行二次提取，10000r/min离心10min，合并2次提取液，用1%的三氯乙酸溶液定容至25mL。其余步骤与标准一致。测试结果如下：
表4 考察提取次数对回收率的影响
06订购信息
