一、实验目的
本研究利用固相萃取法作为样品的前处理方法，HPLC法作为检测手段。该方法可简化样品的前处理过程，节省有机溶剂的使用，操作简便。
二、实验目标物
苏丹红I(CAS:842-07-9)，苏丹红II(CAS:3118-97-6)，苏丹红III(CAS:85-86-9)，苏丹红Ⅳ(CAS:85-83-6)。
三、应用范围
本方法适用于食品中苏丹红染料的HPLC检测及确证。
四、参考标准
《GB/T 19681-2005 食品中苏丹红染料的检测方法高效液相色谱法》。
五、实验材料
biocomma® Copure® 苏丹红检测柱500mg/3mL(Cat.No.COSD3500)。
六、实验方法
1、样品提取
称取均质甜橙试样2.0 g试样(精确至0.001 g)于50 mL离心管中，加入20 mL正己烷，超声5 min，过滤，用10 mL 正己烷洗涤残渣数次，至洗出液无色，合并正己烷液，用旋转蒸发仪浓缩至5 mL以下。
2、SPE柱净化
(1)活化：向苏丹红检测柱中加入6.0 mL正己烷活化。
(2)上样和洗脱：在柱中保持正己烷液面为2 mm左右时上样，立即倒入上述待净化溶液，用正己烷少量多次淋洗浓缩瓶，一并注入层析柱，待样液完全流出后，视样品中含油杂质的多少用10-30 mL正己烷洗柱，直至流出液无色，弃去全部正己烷淋洗液，用含5%丙酮的正己烷液60 mL洗脱，并收集洗脱液。
(3)重新溶解：50 ℃缓慢氮气流条件下吹至近干，用丙酮转移并定容至5 mL定容，经0.45 μm有机滤膜过滤后上液相色谱仪测定。
3、HPLC条件
色谱柱：XR-ODS Ⅱ C18（2.0mm ×75mm×2.2μm）
流动相：A[0.1%甲酸水溶液-乙腈=85:15]；B[0.1%甲酸的乙腈溶液：丙酮=80:20] 梯度洗脱
表1 梯度洗脱条件
流速：1 mL/min
柱温：30 ℃
进样体积：10 μL
波长：520 nm
七、实验结果
1、10mg/kg甜橙基质中苏丹红染料的添加回收结果
表2 10mg/kg甜橙基质中苏丹红染料的添加回收结果
2、添加水平为10mg/kg甜橙基质中苏丹红染料检测色谱图
图1 添加水平为10mg/kg甜橙基质中苏丹红染料检测色谱图
本方法回收率和RSD满足标准要求。