一、实验目的
本研究利用固相萃取法作为样品的前处理方法，HPLC法作为检测手段。该方法可简化样品的前处理过程，节省有机溶剂的使用，操作简便。
二、实验目标物
苏丹红I(CAS:842-07-9)，苏丹红II(CAS:3118-97-6)，苏丹红III(CAS:85-86-9)，苏丹红IV(CAS:85-83-6)
三、应用范围
本方法适用于辣椒粉中苏丹红染料的检测的HPLC检测及确证。
四、参考标准
《GB/T 19681-2005 食品安全国家标准 食品中苏丹红染料的检测方法 高效液相色谱法》。
五、实验材料
biocomma® Copure® 苏丹红检测柱500mg/6mL(Cat.No.COSD6500)。
六、实验方法
1、样品提取
称取1 g辣椒粉(准确至0.001)样品，加正己烷10 mL超声10 min，过滤，用正己烷洗涤残渣数次，至洗出液无色，合并正己烷，旋蒸浓缩至5 mL以下，待检测。
2、SPE柱净化
(1)活化：用10 mL正己烷活化，柱中保持正己烷液面2 mm。
(2)上样和洗脱：取待测液，通过保持柱中正己烷液面2 mm左右时上样，控制流速，用少量正己烷洗涤浓缩瓶数次，全过程不使柱干涸，弃去滤液。取10 mL正己烷淋洗柱，弃去淋洗液。取60 mL 5%丙酮正己烷溶液洗脱，收集洗脱液。
(3)重新溶解：洗脱液于40 ℃氮气吹干，用丙醇转移并定容至5 mL定容，滤膜过滤，供高效液相色谱测定。
3、HPLC条件
设备：Waters Alliance 2695
检测器：Waters 2487 双波长检测器；检测波长：478nm
色谱柱：Welch Ultimate XB-C18 (4.6X250mm)
流动相：A:乙腈 B:0.1mol/L甲酸水溶液
洗脱方式：梯度洗脱
表1 梯度洗脱条件
流速：1 mL/min
柱温：30 ℃
进样体积:20 μL
七、实验结果
1、2mg/kg辣椒粉基质中苏丹红的添加回收结果
表2 2mg/kg辣椒粉基质中苏丹红的添加回收结果
2、添加水平为2mg/kg辣椒粉中苏丹红检测色谱图
图1 添加水平为2mg/kg辣椒粉中苏丹红检测色谱图
本方法回收率和RSD满足标准要求。