一、实验目的
本研究利用固相萃取法作为样品的前处理方法，HPLC法作为分析方法，检测咸鸭蛋中苏丹红的含量。该方法可简化样品的前处理过程，节省有机溶剂的使用，操作简便。
二、实验目标物
苏丹红Ⅰ (CAS:842-07-9)，苏丹红Ⅱ (CAS:3118-97-6)，苏丹红Ⅲ (CAS:85-86-9)，苏丹红Ⅳ ( C A S : 8 5 -83-6)。
三、应用范围
本方法适用于鲜咸鸭蛋中苏丹红的检测的HPLC检测及确证。
四、实验材料
biocomma® Copure® 苏丹红检测柱500mg/6mL(Cat.No.COSD6500)。
五、实验步骤
1、样品提取
准确称取咸鸭蛋黄1.0 g加入6 mL 正己烷，涡旋1 min，振荡5 min， 超声处理5 min，4000 r/min离心5 min，取正己烷层液备用。
2、SPE柱净化
(1) 活化：苏丹红检测柱使用前用10 mL正己烷活化。
(2) 上样和洗脱：在苏丹红检测柱上加入待净化液，弃去流出液，然后用5 mL正己烷淋洗，弃去淋洗液，抽干小柱。用60 mL 5%丙酮正己烷洗脱，收集洗脱液。（整个上样洗脱过程保持流速1 mL/min)。
(3) 重新溶解：洗脱液40 ℃氮吹至近干，用丙醇转移并定容至5 mL定容，过0.45 μm 滤膜，待上机测试。
3、HPLC条件
设 备：Waters Alliance 2695
色谱柱 ：Welch Ultimate XB-C18 (4.6×250 mm，5 μm)
检测器 ：Waters 2487 紫外检测器
流动相：A：乙腈
B：0.2%甲酸水溶液
洗脱方式：梯度洗脱
表1 梯度洗脱条件
流速：1.0 mL/min
检测波长：478nm 、520 nm
进样体积: 20 μL
六、实验结果
1、1 mg/kg咸鸭蛋中苏丹红的添加回收结果
表2 1 mg/kg咸鸭蛋中苏丹红的添加回收结果
2、 添加水平为1 mg/kg咸鸭蛋中苏丹红检测的液相色谱图
图1 添加水平为1 mg/kg咸鸭蛋中苏丹红检测的液相色谱图
本方法回收率和RSD满足标准要求。