一、实验目的
本研究利用固相萃取法作为样品的前处理方法，HPLC法作为检测手段。该方法可简化样品的前处理过程，节省有机溶剂的使用，操作简便。
二、实验目标物
罗丹明B(CAS:81-88-9)。
三、应用范围
本方法适用于进出口食品中罗丹明B的检测的HPLC检测及确证。
四、参考标准
《SN/T 2430-2010 进出口食品中罗丹明B的检测方法》。
五、实验材料
biocomma® Copure® 中性氧化铝萃取柱1g/6mL(Cat.No.COALN61000)。
六、实验方法
1、样品提取
称取辣椒粉2 g(精确至0.01)于50 mL离心管中，准确加入20 mL 20%丙酮正己烷，于涡旋混匀器上混合提取2 min，再超声提取15 min，于4000 r/min离心5 min，上清液过滤待净化。
2、SPE柱净化
(1)活化：中性氧化铝柱使用前使用6 mL正己烷活化。
(2)上样和洗脱：取待净化液10 mL加入中性氧化铝小柱，1滴/秒流速通过中性氧化铝小柱后，弃去溶液，加入10 mL 丙酮-正己烷溶液(20:80, v/v)淋洗，弃去淋洗液，抽干小柱。取10 mL 2%氨水甲醇溶液洗脱小柱，收集洗脱液，洗脱液于50 ℃氮吹至干。
(3)重新溶解：用1 mL甲醇定容，0.22 μm微孔滤膜过滤，供HPLC上样测试。
3、HPLC条件
设备：Waters Alliance 2695
色谱柱：Welch Ultimate XB-C18 (4.6X250mm)
检测器：Waters 2475 荧光检测器，激发波长(Ex)550 nm，发射波长(Em)580 nm
流动相：A：水 B：甲醇
洗脱方式：等度洗脱, A : B=25 : 75
流速：1.0 mL/min
进样体积：20 μL
七、实验结果
1、 25μg/kg辣椒粉中罗丹明B的添加回收结果
表2 25μg/kg辣椒粉中罗丹明B的添加回收结果
2、 添加水平为25μg/kg辣椒粉中罗丹明B检测色谱图
图1 添加水平为25μg/kg辣椒粉中罗丹明B检测色谱图
本方法回收率和RSD满足标准要求。