喹诺酮类药物介绍
喹诺酮类(4-quinolones)，又称吡酮酸类或吡啶酮酸类，是一类合成抗菌药。常用药物有恩诺沙星，培氟沙星，诺菲沙星等。此类药物主要对于多种革兰阴性菌有杀菌作用，是一类人畜通用的药物，被广泛应用于畜牧、水产等养殖业中。但由于科学知识的缺乏和经济利益的驱使，在养殖过程中养殖户不遵守休药期的规定，超标使用兽药的现象普遍存在。人类长期食用兽药超标的食品，药物在体内蓄积，容易引发癌症、畸形、抗药性、青少年性早熟、中老年心血管疾病等病症，对人类危害极大。
逗点生物开发出使用固相萃取法检测动物源性食品中喹诺酮类药物的含量，其中培氟沙星平均回收率100.7%，RSD 4.1%，恩诺沙星平均回收率96.6%，RSD 1.6%，为客户提供关于喹诺酮类药物检测有效的解决方案。
一、实验目的
本研究利用固相萃取法作为样品的前处理方法，HPLC法作为分析方法，检测牛奶和猪肉中喹诺酮类药物的含量。该方法可简化样品的前处理过程，节省有机溶剂的使用，操作简便。
二、实验目标物
恩诺沙星（CAS:93106-60-6），培氟沙星（CAS:70458-92-3）。
三、应用范围
本方法适用于动物源性中喹诺酮含量的HPLC检测及确证。
四、参考标准
《GB/T 213312-2007动物源性食品中14中喹诺酮药物残留检测方法》。
五、实验材料
biocomma® Copure® HLB固相萃取柱200 mg/6 mL (Cat. No. COHLB6200)。
六、实验方法
1、样品提取
1.1牛奶
准确称取牛奶/猪肉试样5.0 g（精确至0.01）于50 mL离心管中，加入10 mL EDTA-Mellvaine缓冲液，涡旋1 min，超声提取10 min，再于4000 r/min下离心5 min，取上清液，按上述步骤再提取两次，离心，合并三次上清液，用EDTA-Mellvaine缓冲液定容至30 mL备用。
2、SPE柱净化
(1)活化：净化前固相萃取柱依次使用6 mL甲醇活化、6 mL水平衡。
(2)上样和洗脱：取10 mL上清液上样，弃去流出液，加2 mL 5 %甲醇水溶液淋洗，弃去淋洗液，将小柱抽干，再用6 mL甲醇洗脱并收集洗脱液。
(3)重新溶解：洗脱液于50 ℃下氮吹至近干，加1 mL甲醇重新溶解，涡旋混匀，过0.22 μm有机滤膜，待上机测试。
3、HPLC条件
设备：Waters Alliance 2695
色谱柱：InerSustain®-C18 (4.6 mm X 250 mm，5 μm)
检测器：Waters 2487双波长检测器
检测波长：254 nm
流动相：A：乙腈 B：0.1%甲酸水溶液
洗脱方式：梯度洗脱
表1 梯度洗脱条件
流速：1 mL/min
进样体积：20 μm
七、实验结果
1、添加水平为1.2 mg/kg牛奶和猪肉基质中喹诺酮的添加回收结果
表2 添加水平为1.2 mg/kg牛奶和猪肉基质中喹诺酮的添加回收结果
2、添加水平为2.0 mg/L喹诺酮检测的标准液相色谱图
图1 添加水平为2.0 mg/L喹诺酮检测的标准液相色谱图
本方法回收率和RSD满足标准要求。