一、实验目的
本实验以固相萃取法对市售蜂蜜进行样品前处理,联合薄层色谱,检测蜂蜜中的寡糖成分,以此鉴定蜂蜜是否掺假。该方法可准确鉴别常规掺假蜂蜜,简单可靠,并能减少有机溶剂的使用量。
二、实验目标物
寡糖。
三、参考标准
《中华人民共和国药典2015版一部·蜂蜜》。
四、实验材料
biocomma® silibase® 蜂蜜检测柱(Cat.No.CO6252-AC)。
五、实验方法
1、样品提取
取样品 2 g,置烧杯中,加入10 mL水彻底溶解。
2、SPE柱净化
(1)活化:25 mL水,过柱速度1秒/滴。
(2)上样和洗脱:当液面到达柱面上2 mm,在真空条件下,使溶液通过柱子,待液面下降到柱面以上2 mm时 ,用7%乙醇25 mL淋洗,弃去淋洗液。再用50%乙醇10 mL洗脱,收集洗脱液。
(3)重新溶解:置65 ℃水浴中减压浓缩至干,残渣加30 %乙醇1 mL使之溶解,作为供试品溶液。
3、薄层色谱条件
薄层板:硅胶G 薄层板
展开剂:正丙醇-水-三乙胺(60:30:0.7)
点样量:3 μL
显色剂:苯胺-二苯胺-磷酸的混合溶液(取二苯胺1 g,苯胺1 mL,磷酸5 mL,加丙醇至50 mL,混匀)
显色方法:喷以显色剂,105 ℃加热至斑点显色清晰,在日光下检视。供试品色谱中,在与对照品相应位置的下方,应不得显斑点。
六、实验结果
对4种不同来源的蜂蜜进行检测,结果表明,4号蜂蜜Rf 低于麦芽五糖迁移位置,
表明该蜂蜜中含有掺假糖浆,为假蜂蜜。
注:1、2、3号为真蜂蜜,Rf 大于0.35,4号为假蜂蜜,Rf 小于0.35。
综合表明,该方法及材料能够准确鉴别真假蜂蜜。