食品合成着色剂，也称为食品合成染料，被广泛应用到食品的加工过程中。鉴于合成着色剂的不安全性，国家加强了对这类合成着色剂的监管，制订了食品合成着色剂的测定标准（GB5009.35-2016）。
逗点生物依据国标的征求意见稿，建立了固相萃取-高效液相色谱法测定食品中8种合成着色剂含量的方法，样品经乙醇氨水提取后，经Copure® PWAX混合型弱阴离子交换柱净化，采用高效液相色谱仪结合紫外检测器测定。
经验证，8种合成着色剂在0.10 μg/mL到10 μg/mL范围内线性良好，R^2>0.995，加标回收率在80%-110 %范围内，符合测试需求。
一、样本前处理
1.1样品提取
准确称取样品2 g（精确至0.001 g），置于50 mL具塞离心管中，加入25 mL乙醇氨水溶液（硬糖需要先加入2 mL水超声使其溶解），涡旋1 min，50℃超声提取20 min，8000 转/分钟离心5 min。
取上清液置于50 mL离心管中，残渣中再加入15 mL乙醇氨水溶液重复提取1次，离心后合并上清液，用乙醇氨水溶液定容至50 mL，即得提取液。
准确吸取提取液10 mL，50℃下氮气浓缩至2 mL左右，分2~3次共加入10 mL 5%甲醇水溶液溶解，作为待净化液。
注：乙醇氨水溶液配制，量取无水乙醇700 mL，加入4 mL氨水，用水稀释并定容至1 L，混匀。
1.2试样的净化浓缩
先依次用6 mL甲醇和6 mL水活化Copure® WAX固相萃取柱（150 mg/6 mL），保持柱体湿润，将待净化液注入柱中，控制流出液流速在1滴/秒，弃去流出液。再依次用6 mL 2%甲酸水和6 mL甲醇淋洗，弃去淋洗液，抽干小柱。
最后用6 mL 2%氨化甲醇洗脱，分两次加入，收集洗脱液，于50 ℃氮吹至近干。准确加入2 mL pH=9的乙酸铵溶液溶解，过0.45 μm PTFE滤膜，弃去2~5滴初滤液，取续滤液作为待测液。
1.3空白实验
1.3.1过程空白：
取一支洁净的50 mL具塞离心管，不称取试样，按照上述1.1和1.2进行提取、净化，浓缩，取续滤液上机测试。
1.3.2空白本底实验
称取样品2 g（精确至0.001 g）按照上述1.1和1.2进行提取、净化，浓缩，取续滤液上机测试。
二、 标准系列工作液
精密移取着色剂混标中间液（1 μg/mL）0.10 mL、0.20 mL于2个1 mL色谱瓶中，再吸取混合标准中间液（10 μg/mL）0.05 mL、0.10 mL、0.20 mL、0.50mL于3个1 mL色谱瓶中，分别用水定容至1 mL，混匀，得标准系列工作液。
浓度分别为0.10 μg/mL、0.20 μg/mL、0.50 μg/mL、1.00 μg/mL、2.00 μg/mL、5.00 μg/mL和10.0 μg/mL。
三、仪器条件
仪器：ThermoFisher U3000液相色谱仪
色谱柱：CommaSil® C18
(4.6 mm×250 mm，5 μm)
流动相：A：20 mmol/L乙酸铵溶液 B：甲醇
洗脱方式：梯度洗脱，见表1
流速：1 Ml/min
柱温：30 ℃
进样量：10 Μl
检测器：紫外检测器
四、实验结果
4.1加标回收
五、注意事项
1）在使用乙醇氨水溶液提取时，需要提取两次以上，提取一次可能会导致提取不充分，导致回收率偏低。
2）过柱前确认样液的pH值＜6，以便于合成着色剂目标化合物和填料PWAX更好的结合。
3）上机之前过滤所用的针式过滤器不能使用尼龙针式过滤器，会吸附部分合成着色剂，导致回收率偏低，建议使用PTFE亲水针式过滤器。
4）在检测赤藓红时，需要注意在使用离心管氮吹时会有少量的赤藓红会附着在离心管上，可以采用涡旋和超声的方法进行溶解，使用玻璃的氮吹管更易溶解；或者在溶解的时候加入一定量的甲醇便于赤藓红的溶解。
六、订购信息
