收获后的花生在流通和储藏过程中,容易受到霉菌的污染而发生霉变。其中,黄曲霉毒素在霉变花生中常被检出。
花生受到黄曲霉毒素B1(AFB1)污染后不仅会降低花生的营养和商业价值,更重要的是影响花生及其制品的可食性和安全性。
免疫亲和法具有方法准确、回收率高、精密度好等优点。逗点生物结合自身产品优势,建立了免疫亲和-高效液相色谱串联质谱法测定花生中AFB1含量的方法。
试样经提取后,经免疫亲和柱净化,经质谱分析,同位素内标法定量。经验证,加标回收率范围90-110%,RSD值小于5%,满足测试要求。
一、样本前处理
1.1提取
花生经粉粹后,称取样本5.0 g(精确至0.01 g)于50 mL离心管(带盖)中,加入100 μL同位素内标工作液(10 ng/mL)。加入20 mL乙腈水溶液(84+16),涡旋振荡提取20 min,8000 r/min离心5.0 min。取4.0 mL提取滤液,加入20 mL PBS溶液,混匀待净化。
1.2净化
将免疫亲和柱连接于固相萃取装置上,将上述全部待净化稀释液过Copure®黄曲霉毒素B1免疫亲和柱(货号:COAFMB103),流速控制在1~2滴/秒。
然后依次加入5.0 mL PBS缓冲溶液和5.0 mL一级水淋洗小柱,弃去全部流出液,压干。用1.0 mL甲醇进行洗脱,关闭阀门浸泡30 s,然后洗脱至进样小瓶中,LC-MS/MS测试。
1.3过程空白实验
不称取试样,按上述步骤进行实验。
二、仪器条件
色谱柱:Commasil® T-C18
(2.1 mm×100 mm,3 μm)
流动相:A:5 mmol/L乙酸铵溶液
B:甲醇(含0.1%甲酸)
流速:0.3 mL/min
柱温:30℃
进样量:5 μL
洗脱程序:梯度洗脱表1
离子源:HESI
扫描方式:正离子模式(ESI+)
鞘气压力:30 arb
辅气压力:8 arb
离子传输管:300 ℃
辅气温度:350 ℃
三、 实验测试结果
四、订购信息