血同型半胱氨酸是一种含硫氨基酸,为蛋氨酸和半胱氨酸代谢过程中产生的重要中间产物。在日常生活中由于原发性原因和继发性原因会影响血同型半胱氨酸代谢导致血同型半胱氨酸浓度堆积升高。会大幅增加冠心病、外周血管疾病及脑血管疾病的发病风险。因此,血同型半胱氨酸是一项重要的人体健康指标。医疗机构会通过对人血清中总同型半胱氨酸的体外定量测量,作为辅助诊断用。

本实验采用逗点生物的Copure®96孔PPT蛋白沉淀过滤板相关设备分析血浆中同型半胱氨酸的含量。不同梯度加标浓度下,同型半胱氨酸回收率良好,在100%-110%之间。

一、设备和材料

1)Copure®96孔PPT蛋白沉淀过滤板

2)biocomma®多功能混匀仪

3)biocomma®96孔正压提取装置

4)biocomma®热封膜仪

二、仪器条件 

仪器:Thermo Scientific TQS Endura

色谱柱:CommaSil® C18 (2.1mm×100 mm, 3 μm)

柱温:40 ℃

进样量:5 μL

流动相:A:水(含0.1%FA) B:甲醇(含0.1%FA)

洗脱方式:梯度洗脱

表 1 流动相梯度洗脱条件

电喷雾电压:3500 V

鞘气压力:35 arb

辅气压力:2 arb

离子传输管:350 ℃

辅气温度:320 ℃

离子化方式:ESI+

采集方式:多反应监测

表 2 各组分母离子和子离子检测的离子对参数

三、样本前处理

取50 µL血浆于PPT的孔中,加入0.5mol/L DDT。用热封膜仪封膜后,1500 rpm涡旋2 min,室温放置10min。再移取300 µL甲醇于PPT的孔中,用热封膜仪封膜后,1500 rpm涡旋2 min.。将PPT与接收板置于正压提取装置中,调节压力,使滤液的流速保持1-2秒/滴,收集滤液,上LC-MS/MS系统中进行检测。

(备注:标准曲线的前处理方法与样本相同。)

四、实验结果 

4.1检测色谱图

图1  50ppb同型半胱氨酸标准溶液检测色谱图

4.2 回收率结果

表 3 血浆中同型半胱氨酸加标回收率结果

从表3 可以看出,不同梯度加标浓度下,同型半胱氨酸回收率良好,在100%-110%之间。

五、订购信息:

关于逗点

深圳逗点生物技术有限公司(Biocomma Limited)成立于2006年,是一家集研发、生产、国内外销售、OEM服务于一体的高新技术企业集团。公司秉承更好滤芯、更好样本前处理的愿景,不断开拓创新,打造了多孔塑料、分离材料、精密注塑三大技术平台,现已发展为样本制备、样本过滤和样本采集产品的领先制造商。

公司已通过ISO9001:2015质量管理体系认证,被评为国家高新技术企业。公司拥有2家子公司、1个研发中心和3个工厂,生产实验室耗材、过滤器材和二类医疗器械和体外诊断试剂,提供高达1500多种产品。公司利用ERP系统进行产品管理,执行严格的质量标准,实现全程可追溯。十余年来,我们已服务于4000多个客户,并为全球数十个知名品牌提供OEM和定制服务。

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