玉米粉中黄曲霉毒素检测的高通量固相萃取方法

黄曲霉毒素(aflatoxins)是一种由黄曲霉和寄生曲霉等真菌经过聚酮途径产生的次生代谢产物，其结构通常包含一个双呋喃环和一个氧杂萘邻酮，天然产生的黄曲霉毒素根据其化学结构不同分为B1、B2、G1、G2四种。

食品遭受产毒真菌以及霉菌毒素污染的问题在世界范围内反复发生，被污染的农作物作为饲料资源被畜禽食用后，携带的霉菌毒素又可在肉、蛋、奶等食品中蓄积，通过食物链传递，危害人类健康。

逗点生物采用24孔Copure® 226多功能净化板，实现了黄曲霉毒素的快速、高通量检测。建立玉米粉中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2检测的LC-MS/MS检测方法。两个水平（0.5.ng/g，1.0 ng/g）的加标回收率均在90-110 %之间，孔间回收率CV值小于5 %。

本方法操作简便快捷，具有回收率高和除杂效果好的优势，能够作为玉米粉中黄曲霉毒素检测的参考方法。

本方法适用于谷物及其制品、豆类及其制品、坚果及籽类、油脂及其制品、调味品、婴幼儿配方食品和婴幼儿辅助食品中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2的测定。

参照《GB 5009.22-2016 食品安全国家标准食品中黄曲霉毒素B族和G族的测定》。

一、样品前处理

1.1样本提取

1）称取 5 g试样于50 mL离心管中，加入一定量同位素内标工作液振荡混合后静置30 min。

2）加入20 mL乙腈-水溶液（84+16），涡旋混匀，置于超声波/涡旋振荡器或摇床中振荡20 min，在6000 r/min下离心10 min，取上清液备用。

1.2样本净化

1）将24孔净化板放置在24孔收集板上，再向净化板孔中加入6 mL样品提取液。

2）将24孔净化板和收集板放置在24孔正压提取装置下，开启气阀开关，使净化板孔和输气孔保持对应，匹配良好。

3）调整气体输出压力，使样品提取液过滤至收集板中。

4）取4 mL样品净化液，40℃下氮气吹干，用1 mL初始流动相复溶，涡旋 30s 溶解残渣，过0.22 μm微孔滤膜，上机分析。

二、仪器条件

仪器设备：UPLC-MS/MS

Thermo Scientific TSQ Endura

色谱柱：Thermo C18

2.1×100 mm， 1.7 um

流动相：A：0.1%甲酸水 B：乙腈

流动相梯度：初始80%A，20%A（0 min~2 min），20%A（2 min~3 min），80%A（3 min~3.1min），80%A（3.1min~5min）

流速：0.3 mL/min

柱温：室温

进样体积：5.0 mL

【质谱条件】

检测方式：多离子反应检测（MRM）

三、实验结果

从图1中可知，经过Copure® 226多功能净化板净化处理后，提取液中色素被明显吸附，减少杂质干扰。

图2中，杂质被明显吸附，TIC色谱图中杂峰更少，上机液更干净；24个孔中黄曲霉毒素的回收率均在90-110%之间，孔间回收率CV值小于5 %，能满足实验使用需求。

四、订购信息