长期吸食烟草，会增加患许多疾病的风险，包括肺癌、慢性阻塞性肺病、中风、心脏病和呼吸系统感染等。目前吸烟与健康已成为世界最受关注的公共卫生问题之一，科学准确测量烟草暴露是研究烟草暴露与健康相关性的基础。尼古丁及其代谢物可替宁是评价烟草暴露的关键生物标记物，通过对尿液、血液、唾液和头发等生物材料中的尼古丁和可替宁的测定，能够评估人体吸烟行为、戒烟情况以及环境烟气的暴露程度和剂量。
本研究以血浆为样本，经净化处理，采用同位素内标，建立了一套血浆中尼古丁及其代谢物可替宁LC-MS/MS的准确定性定量分析方法。经过方法学验证及实际样品的测定考察，本法具有高的灵敏度、稳定性及准确性，可适用于血浆样品中NT、CN的检测分析。
2.1定量限
血浆样品中NT、CN定量限及其内标物代表图谱见图1。
2.2标准曲线和线性
对不同日期处理的多批次样品的线性进行考察，发现批次间的线性良好，R值均大于0.997，可确保检测结果的准确性。
表1 NT、CN标准曲线和线性
2.3 稳定性实验
2.3.1日内稳定性
一天内重复进行3次试验，每次试验进行6个空白样品的加标测定，获得日内稳定性。结果显示NT日内RSD＜6%，CN日内RSD＜2%，说明方法稳定可靠，重现性好。
表2 NT、CN日内稳定性
2.3.2 日间稳定性
5天内，每天进行6个空白样品的加标测定，以获得日间稳定性。结果显示NT日间RSD＜6%，CN日间RSD＜5%，说明方法稳定可靠，重现性好。
表3 NT、CN日间稳定性
2.4 加标回收率
样品低、中、高浓度加标结果如下图。通过验证可知，三个浓度的加标回收率均大于81%，且回收率平行测定RSD较小，说明方法测定结果准确及重现性好，可以确保样品测定的准确性。
表4 NT、CN加标回收率结果
2.5 实际样品测定
对大量实际样品的测定验证方法的可靠性，从图2可以看出，实际样品测定可以获得理想的检测结果，且不存在基质干扰和其他异常干扰峰，说明方法专属性高、特异性强，适合样品的检测。
本文建立了一套血浆中NT、CN的LC-MS/MS方法，通过对定量限、线性、日内/日间稳定性、回收率等方法学的验证，本方法灵敏度高、准确可靠、重现性好，完全满足日常样品的测定要求。通过实际样品的测定，也说明了本方法可靠性，可用于血浆样品中NT、CN的测定。
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