黄曲霉毒素B1的介绍
黄曲霉毒素B1(Aflatoxin B1简写为AFB1)是二氢呋喃氧杂萘邻酮的衍生物，含有一个双呋喃环和一个氧杂萘邻酮(香豆素)，其污染的食物主要是花生、玉米、稻谷、小麦、花生油等粮油食品。黄曲霉毒素B1是目前已知的化学物质中致癌性最强的一种，对肝脏的损害极其严重。
黄曲霉毒素B1的安全限量
国家食品安全标准《GB 2761-2017》规定植物油脂（花生油、玉米油除外）中黄曲霉毒素B1的允许量不得超过10 μg/kg。花生油、玉米油中黄曲霉毒素B1的允许量不得超过20 μg/kg。
逗点生物开发使用免疫亲和柱法检测植物油中黄曲霉毒素B1的含量，平均回收率为92.9%，RSD 4.1%,为客户提供关于植物油中黄曲霉毒素B1检测有效的解决方案。
一、实验目的
本研究利用免疫亲和柱法作为样品的前处理方法，HPLC法作为分析方法，检测植物油中黄曲霉毒素B1的含量。该方法可简化样品的前处理过程，节省有机溶剂的使用，操作简便。
二、实验目标物
黄曲霉毒素B1（CAS:1162-65-8）。
三、应用范围
本方法适用于植物油中黄曲霉毒素B1检测的HPLC检测及确证。
四、参考标准
《GB 5009.22-2016食品安全国家标准 食品中黄曲霉毒素B族和G族的测定》。
五、实验材料
biocomma® Copure® 黄曲霉毒素B1免疫亲和柱法 (Cat. No. COAFMB103)。
六、实验方法
1、样品提取
准确称取植物油试样5.0 g试样（精确至0.01 g）于50 mL离心管中，加入20 mL乙腈-水（84+16）溶液，涡旋混合1 min，超声提取20 min，在5000 r/min离心10 min，提取上清液4 mL于另一个离心管中，加入21 mL水，混匀待净化。
2、免疫亲和柱净化
(1)上样：将12 mL注射器连接于免疫亲和柱上端，取待净化液样品液以1-2滴/秒的速度通过免疫亲和柱，弃掉流出的液体。
(2)淋洗和洗脱：用20 mL水淋洗柱子，分两次淋洗，弃掉流出的液体；抽干小柱；加入2×1 mL甲醇缓慢洗脱亲和柱，流速约为2-3滴/秒；50 ℃下氮吹至近干，待衍生。
3、衍生化反应
(1)加入100 uL三氟乙酸，200 uL正己烷于待衍生样品中，于40 ℃水浴避光衍生15 min。
(2)重新溶解：50 ℃下氮吹至近干，加入1mL乙腈-水（15+85）溶液溶解，0.22 μm滤膜过滤，供HPLC分析。
4、HPLC条件
设备：Waters Alliance 2695
色谱柱：InerSustain®-C18 (4.6 mmX250 mm, 5 μm)
检测器：Waters 2475荧光检测器
检测波长：激发波长：365 nm 发射波长：435 nm
流动相：A：乙腈 B：水
洗脱方式：梯度洗脱
表1 流动相梯度洗脱程序
流速：1 mL/min
进样体积：10 μL
七、实验结果
1、1.0 μg/kg 猪肉基质中黄曲霉毒素B1的添加回收结果
表1 1.0 μg/kg猪肉基质中黄曲霉毒素B1的添加回收结果
2、添加水平为1.0 μg/kg猪肉基质中黄曲霉毒素B1检测的液相色谱图
图1 添加水平为1.0 μg/kg猪肉基质中黄曲霉毒素B1检测色谱图
本方法回收率和RSD满足标准要求。