一、实验目的
本研究利用固相萃取法作为样品的前处理方法，HPLC法作为分析方法，检测火腿中胭脂红和诱惑红的含量。该方法可简化样品的前处理过程，节省有机溶剂的使用，操作简便。
二、实验目标物
胭脂红(CAS:2611-82-7)，诱惑红(CAS: 25956-17-6)。
三、应用范围
本方法适用于火腿或者猪肉中多种合成着色剂的检测的HPLC检测及确证。
四、实验材料
biocomma® Copure® 聚酰胺小柱500 mg/6mL(Cat. No. COPACR66)。
五、实验步骤
1、样品提取
准确称取粉碎好的火腿10.0 g于50 mL离心管中，加入30 mL氨化乙醇溶液（氨水：乙醇：水=20:70:10），涡旋1 min，4000 r/min离心5 min，上清液转移至100 mL鸡心瓶中,50 ℃ 旋蒸至2 mL左右（注意容易暴沸），转移至15 mL离心管中， 加入水至10 mL。样品溶液待净化。
2、SPE柱净化
(1)活化：聚酰胺小柱使用前用6 mL甲醇、6 mL水活化。
(2)上样和洗脱：在聚酰胺小柱上加入10 mL待净化样品，控制流速在1-2滴/秒，弃去流出液。依次用6 mL甲醇、6 mL水淋洗，弃去流出液，抽干。然后用6 mL 5%氨化甲醇进行洗脱，控制流速在1-2滴/秒，收集洗脱液。
(3)重新溶解：洗脱液于45 ℃氮吹至干，加1 mL水定容，混匀，过0.45 μm 水系滤膜（注意防止不合适的滤膜吸附一定量的色素而造成损失），待上机测试。
3、HPLC条件
设 备：Waters Alliance 2695
色谱柱 ：Welch Ultimate XB-C18 (4.6×250 mm, 5 μm)
检测器 ：Waters 2487 紫外检测器
流动相：A：甲醇 B：0.02mol/L乙酸铵缓冲溶液
洗脱方式：梯度洗脱
表1: 梯度洗脱条件
流速：1.0 mL/min
检测波长：254 nm
进样体积：20 μL
六、实验结果
1、0.2 mg/kg火腿中胭脂红和诱惑红的添加回收结果
表1 0.2 mg/kg火腿中胭脂红和诱惑红的添加回收结果
2、 添加水平为0.2 mg/kg火腿中胭脂红和诱惑红检测的液相色谱图
图1 添加水平为0.2 mg/kg火腿中胭脂红和诱惑红检测的液相色谱图
本方法回收率和RSD满足标准要求。