一、实验目的
本研究利用固相萃取作为样品前处理方法，HPLC作为分析方法，检测水产品样品中的喹乙醇的残留水平。该方法操作简便，可简化样品前处理过程，减少有机溶剂的使用。
二、实验目标物
喹乙醇(CAS:23696-28-8)。
三、应用范围
本方法适用于水产品中喹乙醇的检测的HPLC检测及确证。
四、参考标准
《GB/T 8381.7-2009 饲料中喹乙醇的测定 高效液相色谱法》。
五、实验材料
biocomma® Copure® HLB固相萃取柱60mg/3mL(Cat.No.COHLB360)。
六、实验方法
1、样品提取
准确称取5 g匀浆鱼肉试样(精确到0.001 g)于50 mL具塞塑料离心管中，加入35 mL甲醇-水溶液(5:95, v/v)，离心管置入摇床中，室温下恒温振荡器振荡速度110 r/min，避光振荡45 min。提取液在3500 r/min下离心10 min，上清液经滤纸过滤，滤液加入10 mL正己烷，充分混匀后，以5000 r/min离心10 min，弃取上层溶液，下层溶液待净化。
2、SPE柱净化
(1)活化：HLB固相萃取柱使用前依次使用3 mL甲醇和3 mL水活化。
(2)上样和洗脱：将待净化液的样品清液加入已活化好的固相萃取柱中，以1 mL/min的流速过柱，弃去滤液。依次用3 mL 0.02 mol/L 盐酸溶液、0.1 mol/L盐酸溶液、甲醇-水溶液(5:95, v/v)淋洗固相萃取柱，弃去淋洗液，用吸耳球吹出小柱中残留液。用5 mL甲醇洗脱固相萃取柱，收集洗脱液。
(3)重新溶解：洗脱液于40 ℃氮吹吹干，用2 mL甲醇定容，0.22 μm微孔滤膜过滤，供HPLC上机测试。
3、HPLC条件
设备：Waters Alliance 2695
色谱柱：Welch Ultimate XB-C18 (4.6X250mm)
检测器：Waters 2487 紫外检测器
检测波长：380 nm
流动相：A：甲醇 B：0.1mol/L甲酸水溶液
洗脱方式：梯度洗脱
表1 梯度洗脱条件
流速：1 mL/min
进样体积：20 μL
七、实验结果
1、鱼肉基质中喹乙醇的2mg/kg添加回收结果
表2 鱼肉基质中喹乙醇的2mg/kg添加回收结果
2、添加水平为2mg/kg鱼肉中喹乙醇检测色谱图
图1 添加水平为2mg/kg鱼肉中喹乙醇检测色谱图
本方法回收率和RSD满足标准要求。