一、金黄色葡萄球菌的卫生学意义
生物学特性：金黄色葡萄球菌（Staphylococcusaureus，S. aureus）是一种重要的病原菌，隶属于葡萄球菌菌属，有“嗜肉菌”别称，是革兰氏阳性菌的代表，可引起许多严重的感染。金黄色葡萄球菌形态为球形，在培养基中菌落特征表现为圆形，菌落表面光滑，颜色为无色或者金黄色，金黄色葡萄球菌在显微镜下排列成葡萄串状，金黄色葡萄球菌无芽孢、鞭毛，大多数无荚膜。该菌最适宜生长温度为37℃，pH为7.4，耐高盐，可在盐浓度接近10%的环境中生长。
二、金黄色葡萄球菌定性检验法的检验程序
三、操作步骤
3.1 样品的处理
称取25 g样品至盛有225 mL 7.5%氯化钠肉汤无菌均质杯内，8000 r/min～10000 r/min均质1 min～2 min，或放入盛有225 mL 7.5%氯化钠肉汤无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1 min～2 min。若样品为液态，吸取25 mL样品至盛有225 mL 7.5%氯化钠肉汤的无菌锥形瓶（瓶内可预置适当数量的无菌玻璃珠）中，振荡混匀。
·增菌
将上述样品匀液于36 ℃±1 ℃培养18 h～24 h。金黄色葡萄球菌在7.5%氯化钠肉汤中呈混浊生长。
·分离
将增菌后的培养物，分别划线接种到Baird-Parker平板和血平板，血平板36 ℃±1 ℃培养18 h～24 h。Baird-Parker平板36℃±1℃培养24 h～48 h。
3.2 初步鉴定
金黄色葡萄球菌在Baird-Parker平板上呈圆形，表面光滑、凸起、湿润、菌落直径为2 mm～3 mm，颜色呈灰黑色至黑色，有光泽，常有浅色（非白色）的边缘，周围绕以不透明圈（沉淀），其外常有一清晰带。当用接种针触及菌落时具有黄油样黏稠感。有时可见到不分解脂肪的菌株，除没有不透明圈和清晰带外，其他外观基本相同。从长期贮存的冷冻或脱水食品中分离的菌落，其黑色常较典型菌落浅些，且外观可能较粗糙，质地较干燥。
在血平板上，形成菌落较大，圆形、光滑凸起、湿润、金黄色（有时为白色），菌落周围可见完全透明溶血圈。挑取上述可疑菌落进行革兰氏染色镜检及血浆凝固酶试验。
图1 金黄色葡萄球菌在Baird-Parker平板的典型菌落特征
3.3 确证鉴定
3.3.1 染色镜检：金黄色葡萄球菌为革兰氏阳性球菌，排列呈葡萄球状，无芽孢，无荚膜，直径约为0.5 μm～15 μm。
3.3.2 血浆凝固酶试验：挑取Baird-Parker平板或血平板上至少5个可疑菌落（小于5个全选），分别接种到5 mL BHI和营养琼脂小斜面，36 ℃±1 ℃培养18 h～24 h。
取新鲜配制兔血浆0.5 mL，放入小试管中，再加入BHI培养物0.2 mL～0.3 mL，振荡摇匀，置36 ℃±1 ℃温箱或水浴箱内，每半小时观察一次，观察6 h，如呈现凝固（即将试管倾斜或倒置时，呈现凝块）或凝固体积大于原体积的一半，被判定为阳性结果。同时以血浆凝固酶试验阳性和阴性葡萄球菌菌株的肉汤培养物作为对照。也可用商品化的试剂，按说明书操作，进行血浆凝固酶试验。结果如可疑，挑取营养琼脂小斜面的菌落到5 mL BHI，36℃±1℃培养18h～48h，重复试验。
- 注意要点
4.1 7.5% 氯化钠肉汤增菌培养：若样品本身在均质后清澈，培养18 h观察呈现一定程度的浑浊（与培养前相比），则接种平板；若18 h后仍无变化，继续培养至24 h后无论浑浊与否都接种至平板。
4.2 接种原则：革兰氏染色后还剩余10 个或10 个以上菌落，则NA、BHI分别接种5 管；若多于5 个（不包括5 个）不足10 个，则BHI接种5 管，剩余的接种NA；5个及以下则全部接种BHI，不接种NA。
4.3 Baird-Parker平板培养：36±1 ℃培养24 h后观察，有菌落生长则取出，无菌落生长则继续培养至48 h后再观察。若血平板已挑取菌落进行证实试验，则不必再挑取Baird-Parker平板上的菌落进行实验。若血平板上无菌落生长，则应在24 h～48 h内逐步观察Baird-Parker平板是否长菌或有无长菌迹象，有则需配置BHI及NA，挑取Baird-Parker平板上的菌落进行纯化、增菌，36±1 ℃培养24 h。
4.4 血浆凝固酶试验：
（1）根据BHI管数，取冻干血浆粉，每瓶用移液枪加入0.5 mL生理盐水，使其充分溶解，再换移液枪枪头取0.3 mL BHI培养物加入其中（每管BHI用1 个枪头），振荡摇匀后于36±1 ℃培养，计时，每30 min观察一次，如呈现凝固（将试管倾斜或倒置时出现凝块）或半凝固（一般的液体呈现凝固）则判定为阳性。若一直不凝固，则一直观察，直至观察至6 h（查看12 次）还未凝固，则试验终止，判定为阴性结果；若中途出现完全凝固或半凝固，则试验终止，判定为阳性结果。
（2）同时取金黄色葡萄球菌标准菌株（ATCC 6538以及CMCC(B)26003各一支）制成菌悬液后作为阳性对照、以灭菌生理盐水为阴性对照，分别接种至BHI中同步培养后进行血浆凝固酶试验。
（3）若血浆凝固酶试验结果可疑，则挑取NA上的菌落接种BHI再次进行试验。
4.5 结果报告
结果判定：符合可判定为金黄色葡萄球菌。
结果报告：在25 g（mL）样品中检出或未检出金黄色葡萄球菌。