一、实验目的
本研究利用固相萃取法作为样品前处理方法，HPLC法作为检测手段。该方法操作方便，可简化样品的前处理过程，节省有机溶剂的使用。
二、实验目标物
氢化可的松(CAS:50-23-7)。
三、应用范围
本方法适用于牛奶中氢化可的松的检测及确证。
四、实验材料
biocomma® Copure® Silica固相萃取柱500mg/6mL(Cat.No.COSIL6500)。
五、实验方法
1、样品提取
称取牛奶试料5 g于50 mL离心管中，加30 mL乙酸乙酯，均质1 min，350 r/min摇床振动20 min，4200 r/min离心10 min，移取乙酸乙酯层。残渣中加乙酸乙酯25 mL，均质1 min，350 r/min摇床振动20 min，4200 r/min离心10 min，移取乙酸乙酯层。合并两次提取液，40 ℃旋转至近干，加乙酸乙酯1 mL和正己烷5 mL，溶解残渣，待净化。
2、SPE柱净化
(1)活化：用6 mL正己烷活化Silica固相萃取柱。
(2)上样和洗脱：取待测液，通过Silica固相萃取小柱富集，弃去流出液。用6 mL正己烷淋洗固相萃取柱，真空抽干5 min，弃去流出液。用6 mL正己烷-丙酮(6:4, v/v)洗脱萃取柱，收集洗脱液。
(3)重新溶解：洗脱液于40 ℃氮气吹干，加20%乙腈水溶液2.0 mL溶解残余物，过0.22 μm滤膜，供高效液相色谱测定。
3、HPLC条件
设备：Waters Alliance 2695
检测器：Waters 2487 双波长检测器
检测波长：254 nm
色谱柱：Welch Ultimate XB-C18 (4.6X250mm)
流动相：A：乙腈 B：0.1%甲酸水溶液
洗脱方式：梯度洗脱
表1 梯度洗脱条件
流速：1 mL/min
进样体积：20 μL
六、实验结果
1、 牛奶中氢化可的松的1mg/kg添加回收结果
表2 牛奶中氢化可的松的1mg/kg添加回收结果
2、 添加水平为1mg/kg牛奶中氢化可的松检测色谱图
图1 添加水平为1mg/kg牛奶中氢化可的松检测色谱图
本方法回收率和RSD满足标准要求。