一、实验目的
本研究利用免疫亲和柱法作为样品的前处理方法，HPLC作为分析方法，检测玉米、酱油中呕吐毒素的含量。该方法可简化样品的前处理过程，节省有机溶剂的使用，操作简便。
二、实验目标物
呕吐毒素(CAS:51481-10-8)。
三、应用范围
本方法适用于玉米、酱油中呕吐毒素检测的HPLC检测及确证。
四、实验材料
biocomma® Copure® 呕吐毒素免疫亲和柱3 mL (Cat. No. COAFDON103)。
五、实验方法
1、样品提取
玉米样品前处理
称取5.0 g（精确到0.01g）经粉碎玉米置50 mL离心管，加入20 mL水，涡旋混匀，振荡10 min，4000 r/min下离心5 min，上清液全部过滤，再加20 mL水重复提取一次，合并滤液，加水定容至50 mL，滤液待用。
酱油前处理
称取老抽酱油1.0 g（精确到0.01 g）到50 mL离心管，加入10 mL水，振荡10 min，过玻璃纤维滤纸，用5 mL x2水冲洗离心管两次，合并滤液，待净化。
2、免疫亲和柱净化
(1)上样：将10 mL或者20 mL注射器连接于免疫亲和柱上端，取待净化液样品液1 mL以1-2滴/秒的速度通过免疫亲和柱，弃掉流出的液体。
(2)淋洗和洗脱：加20 mL水淋洗柱子,分两次淋洗，弃掉流出的液体，抽干小柱；加入4 mL甲醇缓慢洗脱（先浸泡约30s），分两次添洗脱，流速约为2-3秒/滴，收集流出液。
(3)重新溶解：在50 °C下氮吹至近干，加20 %甲醇水1 mL重新溶解。经0.22 μm滤膜过滤，待上机测试。
3、HPLC条件
设备：Waters Alliance 2695
色谱柱：Inertsustain-C18 (4.6 mm×250 mm, 5 μm)
检测器 ：Waters 2696 DAD检测器
检测波长：218 nm
流动相：A：甲醇 B：水
洗脱方式：等度洗脱, A : B=20 : 80
流速：1.0 mL/min
进样体积：20 μL
六、实验结果
1、1.0 mg/kg玉米、酱油中呕吐毒素的添加回收结果
表1 1.0 mg/kg玉米、酱油中呕吐毒素的添加回收结果
2、 添加水平为1.0 mg/kg呕吐毒素的标准液相色谱图
图1 添加水平为1.0 mg/kg呕吐霉毒素的标准液相色谱图
本方法回收率和RSD满足标准要求。