一、实验目的
本研究利用固相萃取法作为样品的前处理方法，HPLC法作为分析方法，检测牛奶中安赛蜜的含量。该方法可简化样品的前处理过程，节省有机溶剂的使用，操作简便。
二、实验目标物
安赛蜜(CAS:33665-90-6)。
三、应用范围
本方法适用于牛奶中安赛蜜检测的HPLC检测及确证。
四、实验材料
biocomma® Copure® 安赛蜜专用柱。
五、实验步骤
1、样品提取
准确称取牛奶1.0 g于15 mL离心管中，加入3 mL水，加入400 μL 0.25 mol/L亚铁氰化钾及400 μL 1.0 mol/L乙酸锌溶液，超声混匀5 min；4000 r/min离心5 min，取上清液。离心管中继续加入2 mL水，重复提取一次，合并上清液备用。
2、SPE柱净化
(1)活化：固相萃取柱使用前依次用5 mL甲醇、5 mL 水活化。
(2)上样和洗脱：往固相萃取柱中加入合并上清液，收集流出液；再加入4 mL水洗脱，收集合并洗脱液（整个上样和洗脱过程流速控制在1 mL/min内）。
(3)上机分析：洗脱液用水定容至10 mL，摇匀，取1 mL过0.22μm滤膜，供HPLC测试。
3、HPLC条件
设备：Waters Alliance 2695
色谱柱：InertSustain-C18 (4.6 mm×250 mm, 5 μm)
检测器：Waters 2487 紫外检测器
检测波长：214 nm
等度洗脱：A：乙腈 B：20 mmol/L硫酸铵
洗脱方式： A : B=25 : 75
流速：1.0 mL/min
进样体积：20 μL
六、实验结果
1、20.0 mg/kg牛奶中安赛蜜的添加回收结果
表1 20.0 mg/kg牛奶中安赛蜜的添加回收结果
2、 添加水平为2.0 mg/L安赛蜜标准溶液色谱图
图1 添加水平为2.0 mg/L安赛蜜标准溶液色谱图
本方法回收率和RSD满足标准要求。