Commasil®色谱柱
2025 年 3 月 16 日，国家卫生健康委与市场监管总局联合发布 2025 年第 2 号公告，重磅推出《食品安全国家标准 预包装食品标签通则》（GB 7718 – 2025）等50 项食品安全国家标准及 9 项修改单。该公告的实施对食品检测技术提出了新的要求。
针对GB 5009.247-2025《食品安全国家标准 食品中纽甜的测定》，逗点生物技术团队开发了高效液相色谱（HPLC）检测方法，选取了QQ糖、西梅干、高汤复合调味料和酸菜四种食品基质完成了方法验证工作，方法验证结果显示，四种基质的加标回收率均在80-100%之间，符合GB 5009.247-2025对分析方法准确度的要求。
纽甜（Neotame，E961）作为阿斯巴甜（Aspartame）的衍生物，是一种高效非营养型甜味剂，其甜度系数为蔗糖的7,000-13,000倍，具有零热值特性，目前被广泛应用于饮料工业、糖果制品、烘焙食品、医药制剂、调味品等领域。本方法的建立为食品中纽甜含量的准确测定提供了可靠的技术支持，有助于企业应对新标准实施带来的检测需求。
1、试剂配制
1.1 甲酸-三乙胺缓冲液：分别吸取0.8mL甲酸和2.5mL三乙胺，加水定容至1L，pH约为4.5。
1.2 混合提取液：量取甲醇400mL至1L烧杯中，加入500mL甲酸-三乙胺缓冲液，用甲酸调PH到4.5，转移至1L容量瓶，用甲酸-三乙胺缓冲液定容至刻度。
1.3 混合洗脱液：量取甲醇700mL至1L容量瓶，用甲酸-三乙胺缓冲液定容至刻度。
1.4 20mmol/L乙酸铵（0.1%冰乙酸）：称取1.54g乙酸铵，用500mL水溶解，加入1mL冰乙酸，加水定容至1L。
1.5 亚铁氰化钾溶液（92g/L）; 称取106g亚铁氰化钾[K4Fe(CN)6 ·3H2O]，加入适量水溶解，用水定容至1L。
1.6 乙酸锌溶液（183g/L）：称取220g乙酸锌[Zn(CH3COO)2 ·2H2O]，加入适量水溶解，加入30mL冰乙酸，用水定容至1L。
2、标准溶液配制
2.1标准储备液（1.00mg/mL）:准确称取10mg（精确至0.0001g）标准品，用甲酸-三乙胺缓冲液溶解并定容至10mL。4℃下避光保存，有效期3个月。
2.2 标准工作液：分别吸取适量标准储备液（1.00mg/mL），用甲酸-三乙胺缓冲液配制成质量浓度为0.5μg/mL，1μg/mL，5μg/mL，10μg/mL，50μg/mL和100μg/mL系列标准工作液，临用现配。
3、样品的提取
3.1 QQ糖和西梅干
称取5g试样（精确至0.01g）于50mL离心管中，加入25mL混合提取液，于60℃超声30min（超声过程中多次手动摇晃加快样品溶解），冷却至室温后，超声30min提取，4000r/min离心5min。上清液转移至50mL容量瓶，残渣加入20mL混合提取液，振荡5min，4000r/min离心5min，合并两次上清液，用混合提取液定容至刻度线，10000r/min离心5min，做为待净化液。
备注：对于较简单的基质，本应用选择不加沉淀剂，不过滤纸，采用高速离心的方式使样液澄清。
3.2 高汤复合调味料
称取5g试样（精确至0.01g）于50mL离心管中，加入25mL混合提取液，于60℃超声30min（超声过程中多次手动摇晃加快样品溶解），冷却至室温后，超声30min提取，加入1mL亚铁氰化钾溶液（92g/L）和1mL乙酸铵溶液（183g/L），涡旋混匀，4000r/min离心5min。上清液经定量滤纸过滤并转移至50mL容量瓶，残渣加入20mL混合提取液，振荡5min，4000r/min离心5min，上清液经定量滤纸过滤后合并，用混合提取液定容至刻度线，10000r/min离心5min，做为待净化液。
备注：过滤纸时可能会造成目标物的损失，建议先用少量提取液湿润滤纸。
3.3 酸菜
称取5g试样（精确至0.01g）于50mL离心管中，加入25mL混合提取液，于60℃超声30min，加入5mL正己烷，振荡5min，4000r/min离心5min，弃去正己烷层，超声30min提取，加入1mL亚铁氰化钾溶液（92g/L）和1mL乙酸铵溶液（183g/L），涡旋混匀，4000r/min离心5min。上清液经定量滤纸过滤并转移至50mL容量瓶，残渣加入20mL混合提取液，振荡5min，4000r/min离心5min，上清液经定量滤纸过滤后合并，用混合提取液定容至刻度线，做为待净化液。
备注：过滤纸时可能会造成目标物的损失，建议先用少量提取液湿润滤纸。
4、试样净化(Copure® HLB，500mg，6mL)
活化：使用前依次用6mL甲醇、6mL水进行活化，保持柱体湿润；
上样：取10mL待净化液过柱，弃去上样液；
淋洗：用5mL甲酸-三乙胺缓冲液淋洗，弃去淋洗液；
洗脱：用8mL混合洗脱液进行洗脱，收集洗脱液，于60℃水浴下氮吹浓缩至1mL，用甲酸-三乙胺缓冲液定容至2mL，超声涡旋复溶后，过0.22μm亲水PTFE滤膜，上机。
5、仪器条件
仪器：液相色谱仪，ThermoFisher U3000
色谱柱：Commasil® C18（150х 4.6mm，5.0μm）
流动相：A：甲醇，B：20mmol/L乙酸铵（0.1%冰乙酸）
洗脱梯度程序见表1
柱温：30℃
流速：1mL/min
检测波长：210nm
进样量：50μL
6、实验结果
6.1 样品加标结果
6.2 谱图
7、订购信息
