GB 5009.35-2023 《食品安全国家标准 食品中合成着色剂的测定》实施以来,逗点生物推出了Copure® PWAX混合型弱阴离子交换柱专用柱,为广大客户解决了在着色剂检测上遇到的问题,备受客户好评。
根据老师反馈,在测试茶叶中的合成着色剂时,采用GB 5009.35-2023的方法测试时,容易出现堵柱子,回收率不好的情况等,鉴于此,逗点生物采用Copure® PWAX混合型弱阴离子交换柱专用柱和CommaSil® C18色谱柱开发了茶叶基质中的合成着色剂的测试方法。
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一、样品前处理
1.1样品提取
取1.0 g(精确至0.001 g)样品于50 mL离心管中,加入25 mL50%乙醇水溶液,涡旋20min,10000rpm离心2 min,将上清液转移至50 mL离心管中,再加入10mL 50%乙醇水溶液重复提取两次,离心。合并三次提取液,用50%乙醇水溶液定容至50 mL,8000rpm离心5 min,准确移取10 mL上清液于另一50 mL离心管中,加入2 mL甲酸,混匀,待净化。
1.2试样的净化浓缩
先依次用6 mL甲醇和6 mL10%甲酸水活化Copure® PWAX混合型弱阴离子交换柱专用柱(货号:COPWAX6150,150 mg/6 mL,),流出液弃去。保持柱体湿润,将待净化液注入柱中,控制流出液流速在1滴/秒,弃去流出液。再依次用6 mL水和6 mL甲醇淋洗,弃去淋洗液,抽干小柱。最后用6 mL 15%氨化甲醇洗脱,收集洗脱液于15 mL离心管中,于50 ℃下氮吹至近干(200μL左右)。用20mM乙酸铵-甲醇溶液(9:1,pH=9.0)定容至1 mL,涡旋5min,超声溶解5min(保证充分溶解),10000rpm离心5min,过亲水PTFE滤膜,上机分析。
1.3空白实验
1.3.1过程空白
取一支洁净的50 mL具塞离心管,不称取试样,按照上述1.1和1.2进行提取、净化,浓缩,过膜上机测试。
1.3.2空白本底实验
称取试样1 g(精确至0.001 g)按照上述1.1和1.2进行提取、净化,浓缩,过膜上机测试。
二、标准系列工作液
分别精密移取11种着色剂混标中间液(100μg/mL)0.02 mL、0.05mL、0.1 mL、0.2 mL、0.5 mL、1.0 mL于10 mL容量瓶中,用水定容至刻线,摇匀,得标准系列工作液。浓度分别为0.20 μg/mL、0.50 μg/mL、1.0 μg/mL、2.0 μg/mL、5.0 μg/mL、10.0 μg/mL。
三、仪器条件
仪器:ThermoFisher U3000液相色谱仪
色谱柱:CommaSil® (4.6 mm×250 mm,5 μm)
流动相:A:20 mmol/L乙酸铵溶液 B:甲醇
洗脱方式:梯度洗脱,见表1
流速:1 mL/min
柱温:30 ℃
进样量:10 μL
检测器:紫外检测器
检测波长:415 nm、520 nm、610 nm
表1 梯度洗脱程序
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四、实验结果
4.1 加标回收
表2 红茶中11种合成着色剂加标回收率
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注意事项:
1.靛蓝标准溶液临用现配。
2.提取次数参考国标,少量多次原则,浓度过大,需要增加提取次数。
3.过柱时,保持柱体湿润,流速不宜过快,控制在1滴/秒。
4.50℃氮气浓缩至近干,过干容易损失目标物,复溶时不易完全溶解。
5.上机之前过滤所用的滤膜不得使用尼龙滤膜,因为尼龙的化学成分是聚酰胺,会吸附合成着色剂,要用亲水PTFE。
6.过滤膜前离心样液,有助于过膜,避免过滤时出现堵的现象。
五、订购信息
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