2022年最新版食品安全抽检实施细则更新了针对于牛、羊、猪、鸡的肌肉及肝、肾组织中部分四环素类、磺胺类和喹诺酮类的检测方法——《GB 31658.17-2021 动物性食品中四环素类、磺胺类和喹诺酮类药物残留量的测定 液相色谱-串联质谱法》。
逗点生物参照该标准进行试验，并优化了部分参数，建立了一份具有良好回收率及稳定性，能满足国标要求的SPE-HPLC-MS/MS方法，可供参考。
一、样品提取
准确称取粉碎均匀的肉类样品1 g（精确至0.01 g）于干净离心管中，加入8 mL Mcllvaine-Na₂EDTA溶液，涡旋混匀后超声提取20 min，-5℃下12000 r/min离心5 min，取出上清液于另一干净离心管，试样残渣加入8 mL磷酸盐缓冲液，同上述操作，合并两次提取液，-5℃下12000 r/min离心5 min，上清液待净化。
Mcllvaine-Na₂EDTA缓冲液：取柠檬酸·一水12.9g、磷酸氢二钠·十二水10.9g、乙二胺四乙酸二钠·二水 39.2g,加水900mL,用1mol/L的氢氧化钠溶液调节pH至5.0±0.2，用水稀释至1000mL。
磷酸盐缓冲液：取0.05 mol/L磷酸二氢钠溶液190 mL,用0.05 mol/L磷酸氢二钠溶液稀释至1000mL。
二、样品净化
活化：固相萃取柱依次用5 mL甲醇和5 mL水活化。
上样：取上述待净化液加入活化好的固相萃取柱中。
淋洗：依次用5 mL水，5 mL 5%甲醇-水溶液，抽干。
洗脱：用8 mL甲醇：乙酸乙酯：氨水=50:50:2溶液进行洗脱。
收集全部洗脱液，45℃下氮吹至100 μL左右，加入0.1%甲酸溶液定容至1 mL,过PTF亲水滤膜，上机测试。
三、标准曲线溶液的制备
取6个空白基质样品同正常样品一样操作，收集洗脱液后，于洗脱液中分别加入适量标液，再与其他样品洗脱液一同氮吹，定容，使最终上机溶液的浓度分别为2 μg/L、10 μg/L、50 μg/L、100 μg/L、200 μg/L、500 μg/L。
四、仪器条件
1）色谱条件
仪器：UPLC-MS/MS
（Thermo Fisher TSQ Endura）
色谱柱：Hypersil GOLD C18
(2.1 mm×100 mm，1.9 μm)
流动相：A：水（0.1 %甲酸） B：甲醇：乙腈=2:8（0.1 %甲酸）
洗脱方式：梯度洗脱，见表1
流速：0.3 mL/min
柱温：35℃
进样量：10 μL
2）质谱条件
离子源：HESI
电喷雾电压：3500 V
鞘气压力：40 arb
辅气压力：2 arb
离子传输管：380 ℃
辅气温度：350 ℃
及特征离子一览表（*为定量离子）
五、实验结果
猪肉中兽残的总离子流图
猪肉中兽残的总离子流图
优化Tips
① 在提取过程中降低离心的温度至-5℃可以更好的抑制样品中的脂肪在水溶液表面的分散，有利于样品的提取转移。
② 在超声提取完合并两次的提取液之后，再进行一次离心，更好的去除基质的影响，便于上样过柱。
③ 在淋洗过程中使用5 mL 5%甲醇-水溶液淋洗液，可以减少在淋洗过程中部分目标物的损失。
④ 标准中氮吹至100 μL左右，不氮吹干可以减少在氮吹过程中部分目标化合物的损失。
⑤ 复溶时，加入0.1%甲酸溶液定容至1 mL,可以有效的改善部分目标化合物的峰型，同时提高部分化合物的回收率。
⑥为了改善上样后的流速问题，使用 Copure® HLB(货号：COHLB6200-M)较普通的HLB净化柱可以获得更好的流速。
六、订购信息
