非食用着色剂酸性橙Ⅱ是一种常用的工业染料，有强致癌性。因其色泽鲜艳、匀染性好、价格低廉等特点，酸性橙Ⅱ常被不法商家偷偷用于食品生产加工，因而酸性橙Ⅱ被列入食品中禁用着色剂的检测范围。逗点生物参照SN/T 3536-2013 出口食品中酸性橙Ⅱ号的检测方法，使用Copure® PWAX混合型弱阴离子交换柱前处理小柱，对标准进行了优化，获得了满意的实验结果。
一、样本提取与净化
1.样本提取
- 含油脂较小的试样
- 称取2g样品于50mL离心管中，固体样品先加入2-3mL水混匀样品，再加入20mL乙醇-氨水溶液，振荡提10min， 8000 r/min离心5min。取上清液至另一离心管中，残渣加入15mL乙醇-氨水溶液重复提取一次，合并两次上清液，定容至40mL。准确移取20mL70℃氮吹浓缩至5mL左右。涡旋混匀后待净化。
- 注：乙醇氨水溶液配制，量取无水乙醇70mL，加入20mL氨水，用水稀释并定容至100mL，混匀。
- 含油脂较大的试样
- 称取2g样品于50mL离心管中，加入20mL石油醚，涡旋10min，10000 r/min离心5min，弃去上清液。油脂含量较高的可重复提取一次，弃去上清液。加入20mL乙醇-氨水溶液，振荡提取10min， 8000 r/min离心5min，重复提取一次，合并上清液。准确移取20mL 70℃氮吹浓缩至5mL左右。涡旋混匀后待净化。
2.净化
活化：分别用6mL甲醇、6mL 2%甲酸水溶液活PWAX固相萃取柱
上样：将上述待净化提取液加入固相萃取柱
淋洗：依次用3mL 2%甲酸水溶液、3mL甲醇淋洗小柱，压干小柱
洗脱：加入6mL 10%氨水甲醇，压干小柱，收集洗脱液于氮吹管中，70℃氮吹至近干，加入1mL 20mM乙酸铵：甲醇=9：1，超声2-3min，涡旋复溶。过0.22μm亲水PTFE滤膜，上机测试。
3.标准系列工作液
吸取适量中间液，用水稀释，得到浓度为0.1μg/mL、0.2μg/mL、0.5μg/mL、1μg/mL、2μg/mL。
二、 仪器条件
仪器：ThermoFisher U3000液相色谱仪
色谱柱：CommaSil®AQ- C18 (4.6mm×250mm，5μm)
流动相：A：20mmol/L乙酸铵溶液 B：甲醇
洗脱方式：A：B=35：65 等度洗脱
流速：1mL/min，柱温：30 ℃
进样量：50μL
检测器：紫外检测器，检测波长：484 nm
三、实验结果
加标回收
四、订购信息
