一、 样本前处理
样品提取
1.1 草莓果酱
- 称取2g（精确至0.001g）试样于50mL离心管中，加入盐酸溶液（2.0mol/L）40mL，旋紧盖子，摇匀，置于沸水浴中加热30min，取出冷却至室温后，振荡5min，超声5min，10000r/min离心5min，上清液转移至50mL容量瓶中，用水定容至刻度，从中准确移取25mL样液做为待净化液。
1.2 风味发酵乳
- 称取2g（精确至0.001g）试样于50mL离心管中，加入盐酸溶液（2.0mol/L）40mL，旋紧盖子，摇匀，置于沸水浴中加热30min，取出冷却至室温后，振荡5min，超声5min，加入沉淀剂（183g/L乙酸锌溶液2mL、92g/L亚铁氰化钾溶液2mL）涡旋1min，10000r/min离心5min，上清液转移至50mL容量瓶中，用水定容至刻度，从中准确移取25mL样液于50mL离心管中，10000r/min离心5min使样液澄清作为待净化液
1.3 紫薯吐司
- 称取2g（精确至0.001g）试样于50mL离心管中，加入盐酸溶液（2.0mol/L）40mL，旋紧盖子，摇匀，置于沸水浴中加热30min，取出冷却至室温后，振荡5min，超声5min，加入沉淀剂（183g/L乙酸锌溶液2mL、92g/L亚铁氰化钾溶液2mL）涡旋1min，10000r/min离心5min，上清液转移至100mL容量瓶中，残渣加入盐酸溶液（2.0mol/L）40mL，常温下，重复提取1次，合并2次提取液，用水定容至刻度，从中准确移取25mL样液于50mL离心管中，10000r/min离心5min使样液澄清作为待净化液。
试样净化(Copure® 胭脂虫红专用柱，150mg，6mL)
活化：使用前依次用6mL甲醇、6mL 2.0mol/L盐酸溶液进行活化，保持柱体湿润；
上样：将待净化液过柱，弃去上样液；
淋洗：用12mL水淋洗，弃去淋洗液，抽干小柱；
洗脱：用6mL磷酸甲醇溶液（2%）进行洗脱，收集洗脱液，于40℃水浴下氮吹浓缩至近干，用磷酸水溶液（0.1%）定容至2mL，涡旋混匀1min，10000r/min离心5min，上清液过0.22μm亲水PTFE滤膜，上机。
二、仪器条件
色谱柱：Copure® C18（4.6 х 150mm，5.0μm）
仪器：液相色谱仪，ThermoFisher U3000
流动相：A：磷酸水溶液（0.1%），B：磷酸乙腈溶液（0.1%）
洗脱方式：洗脱梯度程序见表1
流速：1.2 mL/min，柱温：40 ℃，进样量：20μL
检测波长：494nm
三、实验结果
注意事项
1. 因过脱脂棉会损失部分目标物，所以此应用省去了脱脂棉过滤步骤。
2. 处理风味调制乳和紫薯吐司时，提取后的样液较浑浊，所以选择加入了沉淀剂。
3. SPE小柱活化时改成了“依次用6mL甲醇、6mL 2.0mol/L盐酸溶液”进行活化。
4.不同样品的酸碱性有所不同，避免过柱淋洗过程甲醇淋洗造成损失，此应用只用12mL水淋洗SPE小柱。
5.洗脱液建议氮吹至近干，然后用磷酸水溶（0.1%）定容至2mL。
6.尼龙滤膜会对胭脂红酸有吸附，建议过亲水的PTFE滤膜。
四、订购信息
