一、实验目的
本研究利用固相萃取法作为样品的前处理方法，HPLC法作为分析方法，检测辣椒粉中苏丹红的含量。该方法可简化样品的前处理过程，节省有机溶剂的使用，操作简便。
二、实验目标物
苏丹红I（842-07-9）、苏丹红II（3118-97-6）、苏丹红Ⅲ（85-86-9）、苏丹红IV（85-83-6）。
三、应用范围
本方法适用于辣椒粉中苏丹红检测的HPLC检测及确证。
四、实验材料
biocomma® Copure® 苏丹红专用检测柱 1000 mg/ 6 mL (Cat. No.COSD61000)。
五、实验方法
1、样品提取
准确称取辣椒粉0.5 g于50 mL玻璃离心管中，加入5 mL 正己烷，超声提取5 min，离心取上清液；重复提取两次，合并正己烷提取液；氮气吹至提取液剩余约5 mL，备用
2、SPE净化
(1)活化：固相萃取柱使用前用10 mL正己烷活化。
(2)上样和洗脱：往固相萃取柱中加入备用液；加入约10 mL正己烷淋洗（视含油量及色带情况进行调整），再用60 mL 7.5 %丙酮-正己烷（v/v）洗脱，收集洗脱液。
(4)定容：洗脱液40℃氮吹至近干，丙酮定容至5 mL，涡旋混匀，滤膜过滤供HPLC测试。
3、HPLC条件
设备：Waters Alliance 2695
色谱柱：InertSustain-C18 (4.6 mm×250 mm, 5 μm)
检测器：Waters 2487 紫外检测器
检测波长：478 nm
流动相：A：乙腈 B：0.1%甲酸水
洗脱方式：梯度洗脱
表1 梯度洗脱条件
流速：1.0 mL/min
进样体积：20 μL
六、实验结果
1、2.0 mg/kg辣椒粉中苏丹红含量的添加回收结果
表2 2.0 mg/kg辣椒粉中苏丹红含量的添加回收结果
2、添加水平为2.0 mg/kg苏丹红标准液相色谱图
图1 添加水平为2.0 mg/kg苏丹红标准液相色谱图
七、结果
淋洗时视色带情况需控制淋洗量（5-15 mL），淋洗量过大会导致苏丹红回收率低。逗点生物开发出使用固相萃取柱法检测辣椒粉中苏丹红的含量，平均回收率90 %以上，RSD 4.0 %以下，符合要求。