一、实验目的
本研究利用固相萃取法作为样品的前处理方法，HPLC法作为分析方法，检测果蔬汁中脱氢乙酸的含量。该方法可简化样品的前处理过程，节省有机溶剂的使用，操作简便。
二、实验目标物
脱氢乙酸(CAS:520-45-6)。
三、应用范围
本方法适用于果蔬汁中脱氢乙酸检测的HPLC检测及确证。
四、参考标准
《GB/T 23377-2009 食品中脱氢乙酸的测定 高效液相色谱法》。
五、实验材料
biocomma® Copure® C18固相萃取柱500 mg/6 mL(Cat. No. COC186500)。
六、实验步骤
1、样品提取
准确称取样品5.0 g于50 mL离心管中，加入10 mL水，用50 % NaOH（v/v）溶液调节pH=7～8，加水稀释至刻度，摇匀，4000 r/min 离心8 min；取上清液20 mL用10 %甲酸水溶液调节pH=4～6，定容至25 mL，取5 mL溶液待净化。
2、SPE柱净化
(1)活化：C18固相萃取柱使用前用5 mL甲醇、5 mL水活化。
(2)上样和洗脱：将待净化样品转移至固相萃取柱中，弃去流出液；用5 mL水淋洗，弃去淋洗液，抽干小柱；加入8 mL甲醇洗脱，收集洗脱液（上样、洗脱过程控制流速在1 mL/min内）。
(3)重新定容：40 ℃缓慢氮气流条件下吹至近干，用水定容至2 mL，0.22 μm滤膜过滤，供HPLC分析。
3、HPLC条件
设备：Waters Alliance 2695
色谱柱：Welch Ultimate XB-C18 (4.6 mm×250 mm, 5 μm)
检测器：Waters 2487 紫外检测器
检测波长：293 nm
流动相：A：甲醇 B：20 mmol/L乙酸铵缓冲溶液
洗脱方式：A : B=10 : 90
流速：1.0 mL/min
进样体积：20 μL
七、实验结果
1、5.0 mg/kg黄瓜汁基质中脱氢乙酸的添加回收结果
表1 5.0 mg/kg黄瓜汁基质中脱氢乙酸的添加回收结果
2、 添加水平为5.0 mg/kg脱氢乙酸检测的液相色谱图
图1 添加水平为5.0 mg/kg脱氢乙酸检测的液相色谱图
本方法回收率和RSD满足标准要求。