一、实验目的
本研究利用固相萃取法作为样品的前处理方法，HPLC法作为检测手段。该方法可简化样品的前处理过程，节省有机溶剂的使用，操作简便。
二、实验目标物
依诺沙星(CAS:74011-58-8)，恩诺沙星(CAS:93106-60-6)，培氟沙星(CAS:70458-95-6)，丹诺沙星(CAS:119478-55-6)。
三、应用范围
本方法适用于奶制品中喹诺酮的HPLC检测及确证。
四、参考标准
《GB/T 21312-2007 动物源性食品中14种喹诺酮药物残留检测方法》。
五、实验材料
biocomma® Copure® HLB固相萃取柱200mg/6mL(Cat.No.COHLB6200)。
六、实验方法
1、样品提取
称取均质牛奶试样5.0 g试样(精确至0.001 g)于50 mL离心管中，加入20 mL EDTA-Mellvaine缓冲溶液，1000 r/ min涡旋混合1 min，超声提取10 min，10000 r/min离心5 min(温度低于5 ℃)，提取三次合并上清液。
2、SPE柱净化
(1)活化：净化前用6 mL甲醇、6 mL水活化。
(2)上样和洗脱：将提取液以2 mL/min的速度过柱，弃去滤液，用2 mL5%甲醇水溶液淋洗，弃去淋洗液，将小柱抽干，再用 6 mL甲醇洗脱并收集洗脱液。
(3)重新溶解：50 ℃缓慢氮气流条件下吹至近干，用1 mL0.2%甲酸水溶液溶解。1000 r/min涡旋混合1 min，经0.45 μm有机滤膜过滤后用于上机测定。
3、HPLC条件
设备：Waters Alliance 2695
检测器：Waters 2487 双波长检测器 检测波长：254nm
色谱柱：Welch Ultimate XB-C18 (4.6X250mm，5 μm)
流动相：A: 乙腈 B: 0.1%甲酸的水溶液
洗脱方式：梯度洗脱
表1 流动相梯度洗脱程序
流速：1 mL/min
柱温：室温
进样体积：20 μL
七、实验结果
1、1mg/kg牛奶基质中喹诺酮的添加回收结果
表2 1mg/kg牛奶基质中喹诺酮的添加回收结果
2、添加水平为1mg/kg牛奶基质中喹诺酮检测色谱图
图1 添加水平为1mg/kg牛奶基质中喹诺酮检测色谱图
本方法回收率和RSD满足标准要求。