一、实验目的
本研究利用固相萃取作为样品前处理方法，GC-ECD和LC-MS/MS作为分析方法，检测普洱中的农药残留水平。该方法操作简便，可简化样品前处理过程，减少有机溶剂的使用。
二、应用范围
本方法适用于茶叶中有机磷类、有机氯类、拟除虫菊酯类和氨基甲酸酯类农药多残留的测定。
三、实验材料
biocomma® Copure® GCB/NH2固相萃取柱500mg/500mg/6mL(Cat. No. CONHGC655)。
四、实验步骤
1、样品提取
称取粉碎好的普洱2 g(精确到0.001 g)，加入50 mL离心管中，加入10 mL乙腈，剧烈振荡1 min，静置30 min，4000 r/min离心5 min。上清液待净化。
2、SPE柱净化
(1) 活化：GCB/NH2固相萃取柱中加入约2 cm高无水硫酸钠，使用前使用10 mL乙腈-甲苯(3:1，v/v)活化。
(2) 上样和洗脱：当溶液液面到达柱吸附层表面时，立即倒入上述待净化溶液4 mL, 用鸡心瓶接收流出液，逐步加入25 mL乙腈-甲苯(3:1，v/v)洗涤小柱，收集上述所有流出液于鸡心瓶中。
(3) 重新溶解：流出液于40 ℃水浴中旋蒸至1 mL左右，加入2 mL乙腈转移至10 mL试管中，于40 ℃下氮气吹干，加入1 mL乙腈溶解残渣，0.22 μm微孔滤膜过滤，分别供GC-ECD和LC-MS/MS上机测试。
3、仪器条件
1.GC-ECD条件
气相仪器：Agilent 7890A
色谱柱：Agilent J&W HP-5, 30 m × 0.32 mm，0.25 μm或者相当者
进样口温度：220 ℃
检测器温度：300 ℃
升温程序：
180 ℃(保持2 min)
以10 ℃/min升温到230 ℃(保持2 min)
以2 ℃/min升温到260 ℃(保持2 min)
以25 ℃/min升温到270 ℃(保持1.6 min)
载气：氦气
流速：1.6 mL/min
进样方式：分流进样，分流比10:1
2.LC-MS/MS条件
色谱柱：Venusil ASB C18(2.1 mm×150 mm, 5 μm)
质谱仪：API 4000
流动相：A: 0.1% HCOOH+10 mM乙酸铵(取1 mL HCOOH和0.77 g乙酸铵至1 L水溶液中)
B: 甲醇溶液
洗脱方式：梯度洗脱
表1 流动相梯度洗脱程序
流速：0.35 mL/min
柱温： 40 ℃
进样体积：5 μL
离子源：电喷雾(ESI)
扫描模式：正离子模式
检测方式：多反应监测(MRM)
表2 质谱仪离子源参数
表3 氨基甲酸酯类农药各组分名称、保留时间及母离子和子离子检测离子对
五、实验结果
1、普洱中农药多残留的添加回收结果
表4 0.25 mg/kg普洱中有机氯和拟除虫菊酯类农药多残留的添加回收结果
表5 0.05 mg/kg普洱中氨基甲酸酯类农药多残留的添加回收结果
2、普洱中农药多残留检测色谱图
图1 添加水平为0.25 mg/kg普洱中有机氯和拟除虫菊酯类农药多残留检测色谱图
图2 添加水平为0.0625 mg/kg普洱中氨基甲酸酯类农药多残留检测色谱图
本方法回收率和RSD满足标准要求。